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04swlcm

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[交流] 酶切问题

大家好，我想问一下，PCR产物可以直接酶切吗？（设计引物时已加酶切位点和保护碱基）还是需要与T载体连接后在酶切呢？非常感谢！
另外，我想知道芽孢杆菌感受态细胞的制备与大肠杆菌感受态制备有区别吗？制备时有没有特别需要注意的？Thank you！
请大家不吝赐教，小女子先谢了哈！哈哈

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1楼 2009-04-22 21:44:49

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引用回帖:

Originally posted by cascc at 2009-4-24 21:56:
即使加了保护碱基切得效率也比较低，我建议你不必省这点事情，到后来有问题更麻烦，况且连接到T载体上测序和克隆都方便些。你觉得呢？也就是多花一天时间。

是吗？我才接触分子，我是做定向进化（易错PCR），我需要在巨大芽孢杆菌里表达，再筛选有益突变子。
你说的就相当于把易错PCR产物连在T载体上，再酶切出目的基因，在与表达载体连接…………？？？这一步就相当于增加酶切效率？？我看有些文献是直接切的，
我才接触分子实验，很多地方不太懂，希望大家多提意见，多交流！谢谢