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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶切问题
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04swlcm

金虫 (小有名气)

[交流] 酶切问题

大家好，我想问一下，PCR产物可以直接酶切吗？（设计引物时已加酶切位点和保护碱基）还是需要与T载体连接后在酶切呢？非常感谢！
另外，我想知道芽孢杆菌感受态细胞的制备与大肠杆菌感受态制备有区别吗？制备时有没有特别需要注意的？Thank  you！
请大家不吝赐教，小女子先谢了哈！哈哈
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1楼 2009-04-22 21:44:49
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cascc

铜虫 (小有名气)
如果你要做表达，建议还是先将片段连接到T载体后测序，正确后再从T载体切下连接到表达载体，建议使用保真性好的酶，防止点突变。但是记得如果用高保真酶，PCR反应结束后加上A，这样才能连接到T载体。如果你直接PCR产物测序，是测不到点突变的，不能反映真实情况。
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9楼2009-04-25 11:52:41
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bbyu007

木虫 (正式写手)
可以直接酶切，第二个问题不知道
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我是笨笨鱼~~~
2楼2009-04-22 22:01:37
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04swlcm

金虫 (小有名气)
还是很感谢啦……
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3楼2009-04-22 22:15:06
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wuer413023

至尊木虫 (文坛精英)

没事领金币
我有一个师兄做芽孢杆菌感受态的，明天我帮你问问
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上邪!我欲与君相知，长命无绝衰。山无陵，江水为竭，冬雷震震，夏雨雪，天地合，乃敢与君绝！
4楼2009-04-22 22:58:50
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