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求助：大肠ET12567的转化问题
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我将构建好的一个质粒（大约8500bp)转化大肠杆菌ET12567,用的是CaCl2法制备ET12567感受态，菌液PCR验证、提取质粒酶切验证均正确，将验证正确的菌用20％甘油保存在－20度； 此时问题出现了：将甘油保藏管菌液重新接LB小试管（含抗性），提质粒，但是此时却见不到质粒的条带了，Why？（ps:提质粒用的试剂是别人刚刚提过质粒的，应该没问题；LB小试管菌长得很好很正常）。我也试过将甘油保藏管菌液先在LB（含同样抗生素）平板活化，然后再接小试管提质粒，结果电泳也没见到我所要的质粒条带（PS：电泳和别人一起跑的，别人的有条带，电泳应该是没问题的） 很急，请各位大牛帮忙分析分析，这到底是怎么回事？难道我的质粒保藏过程中丢失了？苦想了好久，也试验过好几次都是如此，也找不出原因，特此求教！拜谢！ [ Last edited by zhaoxiag on 2009-4-22 at 12:15 ] |
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