24小时热门版块排行榜    

查看: 1340  |  回复: 14
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 zhaoxiag 的 2 个金币 ,回帖就立即获得 1 个金币,每人有 1 次机会
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhaoxiag

银虫 (小有名气)

[交流] 求助:大肠ET12567的转化问题

我将构建好的一个质粒(大约8500bp)转化大肠杆菌ET12567,用的是CaCl2法制备ET12567感受态,菌液PCR验证、提取质粒酶切验证均正确,将验证正确的菌用20%甘油保存在-20度;
      此时问题出现了:将甘油保藏管菌液重新接LB小试管(含抗性),提质粒,但是此时却见不到质粒的条带了,Why?(ps:提质粒用的试剂是别人刚刚提过质粒的,应该没问题;LB小试管菌长得很好很正常)。我也试过将甘油保藏管菌液先在LB(含同样抗生素)平板活化,然后再接小试管提质粒,结果电泳也没见到我所要的质粒条带(PS:电泳和别人一起跑的,别人的有条带,电泳应该是没问题的)
      很急,请各位大牛帮忙分析分析,这到底是怎么回事?难道我的质粒保藏过程中丢失了?苦想了好久,也试验过好几次都是如此,也找不出原因,特此求教!拜谢!

[ Last edited by zhaoxiag on 2009-4-22 at 12:15 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songfenzz

银虫 (小有名气)


zhaoxiag(金币+1):谢谢参与
期待各位高手的答复。。。。。谢谢!
多谢交流~~共同进步!
7楼2009-04-22 23:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

zhaoxiag

银虫 (小有名气)

说明一下:ET12567含卡那和氯霉素抗性;我的质粒带安普抗性的;LB抗性平板和小试管是三种抗性都加的
2楼2009-04-21 17:22:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhyzx

金虫 (小有名气)


zhaoxiag(金币+1,VIP+0):谢谢 4-21 19:40
个人觉得问题应该出在保菌之前。
学习中。。。
3楼2009-04-21 19:13:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoxiag

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhyzx at 2009-4-21 19:13:
个人觉得问题应该出在保菌之前。
学习中。。。

菌的保藏应该没什么问题的,之前都是这样保的大肠没什么问题,非常重要的一点是,甘油保藏管菌液接在抗性培养基上长得很正常的
4楼2009-04-21 19:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
提示: 如果您在30分钟内回复过其他散金贴,则可能无法领取此贴金币
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:40 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:08 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见