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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：大肠ET12567的转化问题
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-4-23 08:45:

ET12567有大量的核酸酶,易降解质粒DNA。是不是质粒被降解了？看ET12567是不是RecA缺陷型，如果不是，可能质粒被降解，之所以抗安普，估计质粒上的抗性基因被整合到菌的基因组上。

我的ET12567是RecA缺陷型的，现在和实验室的师兄师姐讨论了一下，不知道是不是因为安普抗生素的问题（安普抗生素固体粉末冻存在－20度的时间比较长了，有几年了吧，会不会是效价变低了呢？),但是我单独将ET12567接在含三种抗性的LB液体里面，是不长的，这到底是怎么回事呢？
我是要做接合转移的，现在做了两三个月了还没出现阳性接合子，年底就毕业了，现在很着急，不知道哪位有这方面的经验，期待您的指导，感激不尽了！
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11楼2009-04-23 12:54:50
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
Originally posted by zhaoxiag at 2009-4-23 12:54:


我的ET12567是RecA缺陷型的，现在和实验室的师兄师姐讨论了一下，不知道是不是因为安普抗生素的问题（安普抗生素固体粉末冻存在－20度的时间比较长了，有几年了吧，会不会是效价变低了呢？),但是我单独将ET12 ...

从你说的看来，安普抗生素还是没有问题。
如果所保德种都出了这个问题的话，
建议再做重组，转化后筛阳性克隆了。
以后重组质粒最好好用DH5α保种，或者直接提点质粒保存。
没有做过转移咯，多查下文献吧，如果要详细操作，建议下些硕士，博士论文看看。一般实验操作写得很详细。
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Thank-you，so-blue.
12楼2009-04-24 12:55:42
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)
大家帮忙看看啊，谢谢！
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13楼2009-05-05 09:34:13
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)
大牛们帮忙看看哦，非常感谢！
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14楼2009-05-06 21:08:22
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louyiceng
★
zhaoxiag(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
大家帮忙看看啊，谢了
15楼2010-02-10 12:10:26
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