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zhaoxiag

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-4-23 08:45:

ET12567有大量的核酸酶,易降解质粒DNA。是不是质粒被降解了?看ET12567是不是RecA缺陷型,如果不是,可能质粒被降解,之所以抗安普,估计质粒上的抗性基因被整合到菌的基因组上。

我的ET12567是RecA缺陷型的,现在和实验室的师兄师姐讨论了一下,不知道是不是因为安普抗生素的问题(安普抗生素固体粉末冻存在-20度的时间比较长了,有几年了吧,会不会是效价变低了呢?),但是我单独将ET12567接在含三种抗性的LB液体里面,是不长的,这到底是怎么回事呢?
我是要做接合转移的,现在做了两三个月了还没出现阳性接合子,年底就毕业了,现在很着急,不知道哪位有这方面的经验,期待您的指导,感激不尽了!
11楼2009-04-23 12:54:50
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

引用回帖:
Originally posted by zhaoxiag at 2009-4-23 12:54:


我的ET12567是RecA缺陷型的,现在和实验室的师兄师姐讨论了一下,不知道是不是因为安普抗生素的问题(安普抗生素固体粉末冻存在-20度的时间比较长了,有几年了吧,会不会是效价变低了呢?),但是我单独将ET12 ...

从你说的看来,安普抗生素还是没有问题。
如果所保德种都出了这个问题的话,
建议再做重组,转化后筛阳性克隆了。
以后重组质粒最好好用DH5α保种,或者直接提点质粒保存。
没有做过转移咯,多查下文献吧,如果要详细操作,建议下些硕士,博士论文看看。一般实验操作写得很详细。
Thank-you,so-blue.
12楼2009-04-24 12:55:42
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)

大家帮忙看看啊,谢谢!
13楼2009-05-05 09:34:13
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)

大牛们帮忙看看哦,非常感谢!
14楼2009-05-06 21:08:22
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zhaoxiag(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
大家帮忙看看啊,谢了

15楼2010-02-10 12:10:26
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