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zhaoxiag

银虫 (小有名气)

[交流] 求助:大肠ET12567的转化问题

我将构建好的一个质粒(大约8500bp)转化大肠杆菌ET12567,用的是CaCl2法制备ET12567感受态,菌液PCR验证、提取质粒酶切验证均正确,将验证正确的菌用20%甘油保存在-20度;
      此时问题出现了:将甘油保藏管菌液重新接LB小试管(含抗性),提质粒,但是此时却见不到质粒的条带了,Why?(ps:提质粒用的试剂是别人刚刚提过质粒的,应该没问题;LB小试管菌长得很好很正常)。我也试过将甘油保藏管菌液先在LB(含同样抗生素)平板活化,然后再接小试管提质粒,结果电泳也没见到我所要的质粒条带(PS:电泳和别人一起跑的,别人的有条带,电泳应该是没问题的)
      很急,请各位大牛帮忙分析分析,这到底是怎么回事?难道我的质粒保藏过程中丢失了?苦想了好久,也试验过好几次都是如此,也找不出原因,特此求教!拜谢!

[ Last edited by zhaoxiag on 2009-4-22 at 12:15 ]
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)

大家帮忙看看啊,谢了哈
5楼2009-04-22 12:22:34
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)

说明一下:ET12567含卡那和氯霉素抗性;我的质粒带安普抗性的;LB抗性平板和小试管是三种抗性都加的
2楼2009-04-21 17:22:48
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zhyzx

金虫 (小有名气)


zhaoxiag(金币+1,VIP+0):谢谢 4-21 19:40
个人觉得问题应该出在保菌之前。
学习中。。。
3楼2009-04-21 19:13:44
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhyzx at 2009-4-21 19:13:
个人觉得问题应该出在保菌之前。
学习中。。。

菌的保藏应该没什么问题的,之前都是这样保的大肠没什么问题,非常重要的一点是,甘油保藏管菌液接在抗性培养基上长得很正常的
4楼2009-04-21 19:43:58
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