| 查看: 667 | 回复: 8 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
xuehu2008铜虫 (正式写手)
|
[交流]
求助关于载体与基因连接的问题
|
||
|
上次P了一个基因，连进pET28a，用的是BamHI和HindIII的酶切位点。当时连接效率就很低，好几次都没有长出克隆，最后一次长出了一个克隆，送测序结果基因发生了单碱基突变。为了纠正这个突变，做了overlapPCR，结果显示分别P出了突变为点上游和下游的片段，大小无误。再分别以这两个PCR产物为模板，又成功P出了目的基因大小的片段，酶切并胶回收后再检验条带大小也正常，可是这次不管怎样连接产物转化B21感受态后都没有克隆长起。 我用的是Fermentas的内切酶和Takara的连接酶，胶回收试剂盒是Omega的。感受态经检验是没有问题的。 各位大侠能帮着分析分析么？ [ Last edited by xuehu2008 on 2009-4-20 at 12:12 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
311求调剂
已经有4人回复
-
307求调剂
已经有5人回复
-
材料学硕318求调剂
已经有7人回复
-
281求调剂
已经有4人回复
-
304求调剂
已经有7人回复
-
材料工程274求调剂
已经有3人回复
-
303求调剂
已经有4人回复
-
求调剂
已经有6人回复
-
课题组接收材料类调剂研究生
已经有4人回复
-
295复试调剂
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
elvias
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 5850.5
- 红花: 7
- 帖子: 389
- 在线: 91.5小时
- 虫号: 302177
- 注册: 2006-12-02
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤免疫
2楼2009-04-20 09:10:01
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
3楼2009-04-20 09:36:33
zhaocy8903
木虫 (知名作家)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3822.5
- 散金: 1238
- 红花: 17
- 帖子: 5798
- 在线: 1468.5小时
- 虫号: 636507
- 注册: 2008-10-25
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2009-04-20 10:01:32
xuehu2008
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 244.5
- 散金: 95
- 帖子: 487
- 在线: 100小时
- 虫号: 570440
- 注册: 2008-06-07
- 性别: GG
- 专业: 环境生物物理
5楼2009-04-20 12:14:22
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
6楼2009-04-20 12:33:21
xuehu2008
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 244.5
- 散金: 95
- 帖子: 487
- 在线: 100小时
- 虫号: 570440
- 注册: 2008-06-07
- 性别: GG
- 专业: 环境生物物理
лл 7楼2009-04-20 13:02:15
elvias
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 5850.5
- 红花: 7
- 帖子: 389
- 在线: 91.5小时
- 虫号: 302177
- 注册: 2006-12-02
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤免疫
8楼2009-04-20 16:50:06
elvias
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 5850.5
- 红花: 7
- 帖子: 389
- 在线: 91.5小时
- 虫号: 302177
- 注册: 2006-12-02
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤免疫
9楼2009-04-20 16:53:46
