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xuehu2008铜虫 (正式写手)
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求助关于载体与基因连接的问题
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上次P了一个基因，连进pET28a，用的是BamHI和HindIII的酶切位点。当时连接效率就很低，好几次都没有长出克隆，最后一次长出了一个克隆，送测序结果基因发生了单碱基突变。为了纠正这个突变，做了overlapPCR，结果显示分别P出了突变为点上游和下游的片段，大小无误。再分别以这两个PCR产物为模板，又成功P出了目的基因大小的片段，酶切并胶回收后再检验条带大小也正常，可是这次不管怎样连接产物转化B21感受态后都没有克隆长起。 我用的是Fermentas的内切酶和Takara的连接酶，胶回收试剂盒是Omega的。感受态经检验是没有问题的。 各位大侠能帮着分析分析么？ [ Last edited by xuehu2008 on 2009-4-20 at 12:12 ] |
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