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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助关于基因全长
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zhaoyue_82

铁虫 (小有名气)

[交流] 求助关于基因全长

请教各位高手，我现在得到一段400bp左右的片段，请问怎么样才能得到基因全长呢？如果拿不到全长基因，这段片段往下还能做些什么呢？我是绝对新手，请多帮忙！
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1楼 2009-04-17 09:41:58
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zhaoyue_82

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2009-4-19 19:17:
一个月差不多，RACE试剂盒要8000，加上PCR（配合RACE）的一共大概10000-12000，clontech的，我现在就是用这个，试剂盒的效果不错，我已经搞到3歌目的基因了，时间一个半月，生工的测序老是出问题，不然可能会更快 ...

哦，多谢多谢啊！真的太有帮助了！
再请问一下，你拉完全长之后还想做些什么呢？如果我想做定量或是半定量的话，是不是没有全长也能做呢？我是在想，分子这部分，如果我只拉到一条全长基因的话，前面加上6-7章生理生化部分的实验，博士论文的内容会不会单薄了些？基因这部分是不是还得多做点？多谢多谢！！！
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9楼2009-04-20 10:32:13
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢，欢迎常来生物版~ 4-20 12:39
电子克隆,RACE,这方面的网上查一下就会有很多.

若得不到全长,要看你这段基因是不是完整的ORF了,否则就不会有功能,也就没法往下做了
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2楼2009-04-17 10:30:54
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zhaoyue_82

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 小猫三两只 at 2009-4-17 10:30:
电子克隆,RACE,这方面的网上查一下就会有很多.

若得不到全长,要看你这段基因是不是完整的ORF了,否则就不会有功能,也就没法往下做了

恩，多谢多谢！
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3楼2009-04-17 11:05:39
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢，欢迎常来生物版~ 4-20 12:39
先把片段放ESTscan上面，扫描一下，看看方向性，是否基因全长，或者NCBIblast与相近物种基因进行比较，推断一下，找一下阅读框，能否翻译出完整蛋白质，
不是全长的话，依据他设计引物，去3‘和5’race，race完去除引物序列，BLast检验扩出的是否目的片段，如果是拼接(dnaSTAR ASSEMBLE),拼完后找出阅读框，在阅读框2端设计引物，RTPCR扩出完整CDS，或者在基因组上walking

这段序列还可以作为探针，去掉CDNA文库或者DNA文库，筛出基因的全长

[ Last edited by gastrodia on 2009-4-17 at 11:44 ]
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4楼2009-04-17 11:43:35
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