应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌转化线性DNA
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 5273  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌转化线性DNA 已有2人参与

一般我们都会用热击的方法转质粒进感受态细胞。如果要转化的对象是线性DNA，请问要怎么操作呢？谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-11-05 13:09:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

宁心king

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 专业 2018-11-29 14:25:12
高温才会造成蛋白不可逆变性  电转时电击时间很短，其实电击是会造成部分菌死亡的 所以合适的电压很重要  你该了解下蛋白变性相关知识

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

rainontime
9楼2018-11-28 14:43:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宁心king

新虫 (正式写手)
那你应该看一下终止子位置  起始密码子和终止密码子是调控翻译的

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2018-11-28 16:53:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

宁心king

新虫 (正式写手)
电转化

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2018-11-05 13:29:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainontime

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 宁心king at 2018-11-05 13:29:39
电转化

实验室没有电转仪。。。请问需要什么耗材吗？
赞一下 回复此楼
3楼2018-11-05 13:52:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宁心king

新虫 (正式写手)
电转仪，，，电击杯

发自小木虫Android客户端
回复此楼
4楼2018-11-05 14:34:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhz0809

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1。首先线性化的DNA是不能直接转化感受态细胞的
2。线性化的DNA（一般指载体）需要通过连接酶（T4，TOPO酶，无缝克隆）等连接成闭合的环状才能转化感受态细胞
3。你指的是感受态细胞效率低？如果是感受态细胞效率低，可以选用商业化的感受态；或者采用电转的方式转化
赞一下 回复此楼
5楼2018-11-15 11:22:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainontime

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 宁心king at 2018-11-05 14:34:09
电转仪，，，电击杯

请问电转进去的线性DNA会自我降解吗？还是一直留在菌体中呢？谢谢！
赞一下 回复此楼
6楼2018-11-27 11:03:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宁心king

新虫 (正式写手)
★
小冀-: 金币+1, 鼓励回帖，有帮助 2018-11-28 14:45:20
引用回帖:
6楼: Originally posted by rainontime at 2018-11-27 11:03:31
请问电转进去的线性DNA会自我降解吗？还是一直留在菌体中呢？谢谢！...

会降解  需要一种蛋白保护片段不被降解  如pkd46便可产生

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-11-27 23:30:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainontime

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 宁心king at 2018-11-27 23:30:53
会降解  需要一种蛋白保护片段不被降解  如pkd46便可产生
...

谢谢！我最近已经开始做电转了，在制作感受态这一步时有一个困惑。第二天在转接菌之后，加入阿拉伯糖诱导剂，使gam、beta和exo三个蛋白表达，然后再收菌制备感受态细胞。这些蛋白不会因为放入-80℃冰箱再拿出来而失活吗？电转的时候那么大电压也对蛋白活性没有影响吗？想不太明白，还请前辈指教一二，谢谢~~~
赞一下 回复此楼
8楼2018-11-28 14:22:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by rainontime at 2018-11-28 14:22:26
谢谢！我最近已经开始做电转了，在制作感受态这一步时有一个困惑。第二天在转接菌之后，加入阿拉伯糖诱导剂，使gam、beta和exo三个蛋白表达，然后再收菌制备感受态细胞。这些蛋白不会因为放入-80℃冰箱再拿出来而失 ...

首先呢，表达的蛋白在胞内，未分泌到胞外，只要菌体活着，应该会有活性；但是时间长的话会降解、失活，而且低温保存时间长，感受态转化效率也会降低，所以我们敲除的感受态是现做现用，效率比较高；第二点，电转的时候，绝大多数的细胞应该都被电死了，所以电转的感受态一般浓度比氯化钙感受态要大得多
赞一下 回复此楼
···
10楼2018-11-28 14:44:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rainontime 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 287求调剂 +7 land xuxu 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:44 by wxiongid
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +4 荷包蛋hyj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 00:39 by wxiongid
[考研] 一志愿郑州大学，080500学硕，总分317分求调剂 +4 举个栗子oi 2026-03-24 5/250 2026-03-26 23:15 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿北化求调剂 +3 Jsman 2026-03-22 3/150 2026-03-26 21:06 by ajpv风雷
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 303求调剂 +7 元夕元 2026-03-20 8/400 2026-03-26 20:38 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +3 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:35 by 求调剂zz
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +6 谷雨上岸 2026-03-23 7/350 2026-03-26 18:55 by 不吃魚的貓
[考研] 机械学硕310分，数一英一，一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭