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rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌转化线性DNA已有2人参与

一般我们都会用热击的方法转质粒进感受态细胞。如果要转化的对象是线性DNA,请问要怎么操作呢?谢谢!
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by rainontime at 2018-11-28 14:22:26
谢谢!我最近已经开始做电转了,在制作感受态这一步时有一个困惑。第二天在转接菌之后,加入阿拉伯糖诱导剂,使gam、beta和exo三个蛋白表达,然后再收菌制备感受态细胞。这些蛋白不会因为放入-80℃冰箱再拿出来而失 ...

首先呢,表达的蛋白在胞内,未分泌到胞外,只要菌体活着,应该会有活性;但是时间长的话会降解、失活,而且低温保存时间长,感受态转化效率也会降低,所以我们敲除的感受态是现做现用,效率比较高;第二点,电转的时候,绝大多数的细胞应该都被电死了,所以电转的感受态一般浓度比氯化钙感受态要大得多
···
10楼2018-11-28 14:44:58
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宁心king

新虫 (正式写手)

2楼2018-11-05 13:29:39
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rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 宁心king at 2018-11-05 13:29:39
电转化

实验室没有电转仪。。。请问需要什么耗材吗?
3楼2018-11-05 13:52:16
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宁心king

新虫 (正式写手)

电转仪,,,电击杯

发自小木虫Android客户端
4楼2018-11-05 14:34:09
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