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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 甲醇诱导毕赤酵母表达
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如梦微酸

新虫 (初入文坛)

[求助] 甲醇诱导毕赤酵母表达 已有2人参与

我把菌放在50ml的BMGY里面培养，然后诱导的时候是用的25ml的BMMY，菌体挺多的，BMMY的量会不会有点少？

@youlinglyw @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-11-01 12:18:55
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jianghuqixia

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不会的，有时候优化也会加这一项，就是采取不同的BMMY体积来重悬酵母菌体
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微生物发酵
2楼2018-11-01 20:09:59
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如梦微酸

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jianghuqixia at 2018-11-01 20:09:59
不会的，有时候优化也会加这一项，就是采取不同的BMMY体积来重悬酵母菌体

我今天诱导好了，然后取上清，盐析蛋白，发现表达量少的可怜，几乎没有。是不是诱导的时候菌体量太多，BMMY有点不够

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3楼2018-11-02 23:41:08
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xmcsxq0606

新虫 (正式写手)
我们都用5ml诱导的 3d就可以

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4楼2018-11-04 21:07:57
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如梦微酸

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xmcsxq0606 at 2018-11-04 21:07:57
我们都用5ml诱导的 3d就可以

那可能是我诱导时间太短了？我只诱导了24h

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5楼2018-11-15 00:13:49
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苦逼的孩

新虫 (初入文坛)
你好，楼主，我现在也在做这个实验，最近也碰到了同样的问题，诱导不出来，应该从哪方面着手改进呢，您后期解决了这个问题了吗，

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6楼2019-11-29 00:12:51
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 苦逼的孩 at 2019-11-29 00:12:51
你好，楼主，我现在也在做这个实验，最近也碰到了同样的问题，诱导不出来，应该从哪方面着手改进呢，您后期解决了这个问题了吗，

请确定好前面基因重组没有问题，此外不知道你的目的基因上是否带有标签？若有的话可以取诱导完的上清做一下ELISA，看是否有蛋白表达，然后根据结果来进行下一步实验
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7楼2019-11-30 10:23:31
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ERIC20081938

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 如梦微酸 at 2018-11-15 00:13:49
那可能是我诱导时间太短了？我只诱导了24h
...

24h时间太短，一般都要诱导发酵120h。
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Flytothesky```
8楼2019-12-04 14:40:33
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