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Bena1019

新虫 (初入文坛)

[求助] 急!!!PCR扩增长片段 已有2人参与

PCR扩增11000左右片段,上下游引物tm差十几度(因为下游引物要扩的片段gc含量很高所以下游引物tm高(78度)上游(64度)),要么跑不出结果,要么非特异性条带(2000多bp),我该怎么优化?下游引物没法再短了(16bp了)

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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Bena1019

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Eternity宇 at 2018-10-08 11:11:24
78和64……你这退火温度也太高了吧

这是没办法了,引物序列不能改的,只能要么延长要么缩短

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4楼2018-10-08 11:14:41
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

2楼2018-10-08 11:11:24
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macgray11

禁虫 (小有名气)

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本帖内容被屏蔽

3楼2018-10-08 11:13:52
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Bena1019

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by macgray11 at 2018-10-08 11:13:52
建议楼主分成大片段扩增,或者用Takara的Primer-Star专门扩高GC的试试,应该有效果的

用的就是primer star,但是不行,我不知道哪里有问题,可以调整哪里,体系还是PCR条件

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5楼2018-10-08 11:17:50
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