24小时热门版块排行榜    

查看: 1844  |  回复: 6

yuanziyu

新虫 (初入文坛)

[交流] 荧光定量PCR 已有5人参与

做荧光定量PCR,用的是罗氏480仪器跑的,跑出来的结果内参Ct值在25~27之间,Ct值偏大的原因是什么?可以保证引物没有问题,内参其他人跑的结果在20左右,跑的程序有45个循环,求大神分析原因。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
内参引物一般不会有问题,可以考虑下
1.rna提取如何,跑胶了吗?rna完整度/纯度
2.反转有没有漏加东西,内参ct值25以上反转效率不是很好
3.cnda稀释如何
4.qpcr有没有加错孔

发自小木虫IOS客户端
2019更好更棒!
2楼2018-10-01 11:49:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
3楼2018-10-05 21:13:53
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

yuanziyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by GRUBBY_WU at 2018-10-01 11:49:17
内参引物一般不会有问题,可以考虑下
1.rna提取如何,跑胶了吗?rna完整度/纯度
2.反转有没有漏加东西,内参ct值25以上反转效率不是很好
3.cnda稀释如何
4.qpcr有没有加错孔
...

cDNA稀释到300浓度左右,没有加错孔,rna跑胶后也是正常的,28S最亮,现在怀疑是反转录的问题,因为反转录同一批材料,有一部分样品反转录后的浓度相对低一些
4楼2018-10-11 19:20:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

会飞的二驴

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到了这种问题,请问解决了吗?
5楼2019-05-14 12:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

godloveplum

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
能不能请问一下罗氏480的扩增效率是怎么换算的呢?比如说软件显示的E=1.975,是怎么换算成百分数的呢?
Nothingisimpossibleforawillingheart!
6楼2022-03-01 10:59:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winy321

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
cDNA浓度可能太低了,可以试试提高浓度再跑内参

发自小木虫Android客户端
7楼2022-03-07 08:35:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuanziyu 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 08:33 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 06:00 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 05:51 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 02:40 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:47 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 01:12 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 00:41 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见