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yuanziyu

新虫 (初入文坛)

[交流] 荧光定量PCR 已有5人参与

做荧光定量PCR,用的是罗氏480仪器跑的,跑出来的结果内参Ct值在25~27之间,Ct值偏大的原因是什么?可以保证引物没有问题,内参其他人跑的结果在20左右,跑的程序有45个循环,求大神分析原因。
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
内参引物一般不会有问题,可以考虑下
1.rna提取如何,跑胶了吗?rna完整度/纯度
2.反转有没有漏加东西,内参ct值25以上反转效率不是很好
3.cnda稀释如何
4.qpcr有没有加错孔

发自小木虫IOS客户端
2019更好更棒!
2楼2018-10-01 11:49:17
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
3楼2018-10-05 21:13:53
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yuanziyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by GRUBBY_WU at 2018-10-01 11:49:17
内参引物一般不会有问题,可以考虑下
1.rna提取如何,跑胶了吗?rna完整度/纯度
2.反转有没有漏加东西,内参ct值25以上反转效率不是很好
3.cnda稀释如何
4.qpcr有没有加错孔
...

cDNA稀释到300浓度左右,没有加错孔,rna跑胶后也是正常的,28S最亮,现在怀疑是反转录的问题,因为反转录同一批材料,有一部分样品反转录后的浓度相对低一些
4楼2018-10-11 19:20:12
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会飞的二驴

新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到了这种问题,请问解决了吗?
5楼2019-05-14 12:33:02
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godloveplum

金虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
能不能请问一下罗氏480的扩增效率是怎么换算的呢?比如说软件显示的E=1.975,是怎么换算成百分数的呢?
Nothingisimpossibleforawillingheart!
6楼2022-03-01 10:59:54
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winy321

新虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
cDNA浓度可能太低了,可以试试提高浓度再跑内参

发自小木虫Android客户端
7楼2022-03-07 08:35:03
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