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GP009

新虫 (小有名气)

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[求助] 有关ABTS测漆酶活性的实验已有1人参与

这一段一直在用ABTS测漆酶活性。有几个问题想要懂得这方面的大佬们给予解答一下。1.关于配制的0.5mmolABTS溶液的问题，不应该是算好取ABTS多少，用蒸馏水溶解就好了吗（这里溶液配出的是无色）？还是说要跟过硫酸钾复配？2.就是求一个正确的计算公式？3.我按照1方式配的ABTS结果测的吸光度值呈下降趋势，为什么？问题有点多，请各位小伙伴帮忙解答一下，不胜感激。

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1楼 2018-09-26 20:51:05

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张小妞啊

新虫 (初入文坛)

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现在在测漆酶活性，用的也是ABTS法但是420nm时吸光度值不变，请教楼主原因，或者具体的实验方法，十分感谢。

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3楼2019-11-15 09:08:01

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GP009

新虫 (小有名气)

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补一句:就是测漆酶活性时，配好的ABTS溶液应该是无色的还是浅绿色

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2楼2018-09-26 20:56:12

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gbbio

铁虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

我们这几天也在做，ABTS用水配置母液20mM，终浓度是0.5-1mM，都应该是无色的，变绿了就是被氧化了。
公式我这也贴不过来，各个文献大同小异了。
吸光度下降的问题我觉得是反应时间过长了，这个要看样品种类、样品状态、反应体系来看；文献里不少建议一定温度反应一段时间再测，但是我放5min后OD值就不上涨或下降了，说明反应体系饱和了/反应终止了；我后来就没有留反应时间，而且如果不是酶标仪来测的话每一批样品不能太多，个人经验加了酶液和ABTS后超过7、8min吸光度可能就不是线性上升了，甚至是持平或者下降了。
仅供参考。

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吾将上下而求索