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提取真菌中的DNA
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最近在提霉菌的DNA,然后我的步骤是用无菌水洗培养皿上培养好的霉菌,离心去上清(4℃,12000r/min,15min),将沉淀用1mL的DNA提取液溶解,65℃水浴1h30min(每隔10min进行摇晃),然后加入60uL 20mg/mL溶菌酶,37℃稍微水浴,再加入10uL蛋白酶k和10uLRNA酶,37℃水浴30min(每隔10min进行摇晃),离心取上清(4℃,12000r/min,5min),加入1/2上清液体积的Tris平衡酚,以及和上清液等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)混匀,离心(4℃,12000r/min,5min),取上清,加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),混匀,离心,取上清加2.5倍体积的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜,离心取上清,加入400uL75%乙醇,吹干,用水溶解。 现在问题出在加了无水乙醇之后,我放在-20℃过夜之后还是没有沉淀,也没有絮状物,请问我是哪一步可能出了问题呢? |
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