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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA无主条带
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含笑~

银虫 (正式写手)

[交流] DNA无主条带

提取污水中的总基因组DNA，共6个样，可无主条带，原因何在呢？用的 OMEGA 的kit,用lysozyme和SDS 破壁，然后RNAase除RNA，最后通过柱子回收DNA. 像这样的条带能P出来吗？

[ Last edited by 含笑~ on 2009-4-7 at 09:43 ]
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1楼 2009-04-07 09:42:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢，欢迎常来生物版~ 4-7 12:51
可以了~~
看你要P多长的片段，只要是不超过你模板长度的片段绝对可以
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2楼2009-04-07 11:44:17
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含笑~

银虫 (正式写手)
谢谢三磷酸腺苷!
基因组DNA在10k-20k bp 间,要p的目的条带200bp左右,准备先p下试试。不解拖尾的是什么，需要买纯化试剂盒纯化吗

[ Last edited by 含笑~ on 2009-4-7 at 12:17 ]
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3楼2009-04-07 12:15:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
350784478(金币+1):谢谢
拖尾是基因组断裂现象，很正常的
反复冻融也会
无需进一步纯化
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4楼2009-04-07 12:30:00
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含笑~

银虫 (正式写手)

回复三磷酸腺苷

回复三磷酸腺苷，是提取后马上电泳的，没冻融过，这样的话就是提取过程中DNA已经断裂了，怎样才能改善呢，PS：怎样区分是否有RNA杂质
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5楼2009-04-07 14:39:49
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
你这个DNA根本就没提出来，至少在gel上是看不到的，smear的条带是降解的RNA
OMEGA这个试剂盒根本不是进口的是国内南方的一个私人人的生物公司，几年前就有那时候打电话问一些相关的技术问题，电话始终打通不了，所以，建议你还是别用这个试剂盒，当然了，这些都是个人观点，仅供参考

[ Last edited by sutao1979 on 2009-4-7 at 16:54 ]
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会当凌绝顶，一览众山小
6楼2009-04-07 16:50:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 含笑~ at 2009/4/7, 14:39:
回复三磷酸腺苷，是提取后马上电泳的，没冻融过，这样的话就是提取过程中DNA已经断裂了，怎样才能改善呢，PS：怎样区分是否有RNA杂质

操作的时候轻柔点就可以了，减少用枪吹打，可以用弹管壁等方法混匀
加RNase处理一下就可以去除RNA，但一般无需这么纠结……

至于楼上说的不是DNA而是RNA，其实因为你说是10~20kb之间，那么应该就是DNA了，RNA没那么大
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7楼2009-04-07 17:00:57
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含笑~

银虫 (正式写手)

回复sutao1979

OMEGA试剂盒技术支持的电话020-32058915，找朱经理，我以前打过电话咨询，成都地区归他管的，不清楚你在哪里，你可以直接从你买试剂的人那要电话，他会给你的！
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8楼2009-04-08 09:19:09
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含笑~

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-4-7 17:00:


操作的时候轻柔点就可以了，减少用枪吹打，可以用弹管壁等方法混匀
加RNase处理一下就可以去除RNA，但一般无需这么纠结……

至于楼上说的不是DNA而是RNA，其实因为你说是10~20kb之间，那么应该就是DNA了， ...

操作时，有时用枪吹打，有时用涡旋，不知哪种更能保证DNA 的完整性。加过RNAase 的，呵呵。P了下，目的条带很亮，但阴性对照也出条带了，marker之后是阴性对照。谢谢你的热心！

[ Last edited by 含笑~ on 2009-4-8 at 09:39 ]
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9楼2009-04-08 09:25:02
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