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小豆豆海丽

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2018-09-12 10:15:36
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小豆豆海丽(渊博震天代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2018-09-12 10:59:29
跟提质粒后，PCR一个道理。模版都是质粒。
一个菌落有N多细菌，一个细菌内有N多个的质粒。只要其中一部分漏出来／跑出来／破裂出来，就足够做模版了。
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2018-09-12 10:20:13
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macgray11

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
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3楼2018-09-12 11:09:42
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小豆豆海丽

禁虫 (初入文坛)
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4楼2018-09-13 08:49:08
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小豆豆海丽(渊博震天代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2018-10-21 12:50:33
因为载体上有T7启动子，你的片段上没有这一段，28a载体，T7启动子PCR的结果应该是500-700左右的片段，如果你的片段连接到载体上，理论上应该P出来的条带应该是你的片段长度+500-700，所以如果可以通过跑胶初步检测是不是连接成功，成功之后在测序。
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生活活生生累死
5楼2018-09-13 09:33:34
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小豆豆海丽

禁虫 (初入文坛)
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6楼2018-09-13 23:35:14
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嘻哈的yes

新虫 (初入文坛)
求助菌落PCR步骤~

发自小木虫Android客户端
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7楼2018-09-15 22:12:33
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170243

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bio转录组 at 2018-09-13 09:33:34
因为载体上有T7启动子，你的片段上没有这一段，28a载体，T7启动子PCR的结果应该是500-700左右的片段，如果你的片段连接到载体上，理论上应该P出来的条带应该是你的片段长度+500-700，所以如果可以通过跑胶初步检测是 ...

您好，我目前是第一次做菌落PCR，因此有很多问题想不明白，我的目标条带在200bp左右，使用的是Takara的PMD19T载体，怎样通过跑胶结果来看是否连接上了呢？是跑胶结果出现自己之前200bp大小的目标条带还是出现长度为载体（2692bp）加上200bp（目标条带）的条带时才可以呢？我目前还没跑胶，所以想咨询准备一下，另外，如果没有连接上，那么会不会转化的时候只有目标条带转到了感受态细胞内，这样菌落PCR也会出现目标条带吧，不知道会不会有这种情况出现呢？求大神赐教
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8楼2018-10-19 11:30:17
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

质粒DNA提取方法之一，直接把菌液放到95度加热5分钟，离心，上清里就有粗提的质粒了。
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采菊东篱下，悠然见南山。
9楼2018-10-19 16:21:12
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lizimu566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 170243 at 2018-10-19 11:30:17
您好，我目前是第一次做菌落PCR，因此有很多问题想不明白，我的目标条带在200bp左右，使用的是Takara的PMD19T载体，怎样通过跑胶结果来看是否连接上了呢？是跑胶结果出现自己之前200bp大小的目标条带还是出现长度为 ...

菌落pcr验证或者可以提取质粒酶切验证
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10楼2018-10-21 10:30:46
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