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supermannnn

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE样品条带不出现,maker 蛋白正常

如题..... 请问各位我跑sds-page时候,maker 蛋白条带清晰 但是其他的样品条带不出现,是否可以排除电泳过程原因和上样缓冲液的原因呢?是否是样品蛋白的浓度不够?

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maoniuniu

新虫 (小有名气)

建议实验出问题的时候加对照,marker严格来说不能作为对照。你page下游是直接考染?条带不出现的原因真的很多,如果加个第三方对照蛋白能够正常电泳和染色,可以再考虑你自身蛋白的性质,也可能量太少,染不出来,建议提供更多信息

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2楼2018-09-07 18:28:46
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supermannnn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by maoniuniu at 2018-09-07 18:28:46
建议实验出问题的时候加对照,marker严格来说不能作为对照。你page下游是直接考染?条带不出现的原因真的很多,如果加个第三方对照蛋白能够正常电泳和染色,可以再考虑你自身蛋白的性质,也可能量太少,染不出来,建 ...

嗯嗯 下次加个其他的蛋白试试,还想请教一下,买的5x上样缓冲液需要稀释5倍再用吗?

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3楼2018-09-07 18:41:05
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白话八股

金虫 (正式写手)

loading buffer 问题或者样品处理问题

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最爱的那个人会出现在身边。
4楼2018-09-07 18:53:32
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maoniuniu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by supermannnn at 2018-09-07 18:41:05
嗯嗯 下次加个其他的蛋白试试,还想请教一下,买的5x上样缓冲液需要稀释5倍再用吗?
...

一般试剂使用浓度都是1×

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5楼2018-09-07 20:24:32
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maoniuniu

新虫 (小有名气)

内容已删除
6楼2018-09-07 20:25:59
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supermannnn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by maoniuniu at 2018-09-07 20:24:32
一般试剂使用浓度都是1×
...

好的,感谢

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7楼2018-09-07 20:41:44
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supermannnn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by maoniuniu at 2018-09-07 20:25:59
意思是你上样如果是10微,里面包含2微的5×loading
...

就是说样品蛋白:5xloading 为4:1咯 ...用的时候还是用5x loading ?

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8楼2018-09-07 20:53:10
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maoniuniu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by supermannnn at 2018-09-07 20:53:10
就是说样品蛋白:5xloading 为4:1咯 ...用的时候还是用5x loading ?
...

5×的母液,最终使用浓度是1×,就是说你准备每孔上样10微的话,这10微里包含5×的母液2微(10微÷5),加上你的蛋白样品(蛋白的量按你自己的需要取),最后用水或者其他合适的buffer(比如你用来溶解蛋白的buffer)将整体的体积补齐到10微

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9楼2018-09-08 06:14:55
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supermannnn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by maoniuniu at 2018-09-08 06:14:55
5×的母液,最终使用浓度是1×,就是说你准备每孔上样10微的话,这10微里包含5×的母液2微(10微÷5),加上你的蛋白样品(蛋白的量按你自己的需要取),最后用水或者其他合适的buffer(比如你用来溶解蛋白的buffe ...

哦哦,懂了,十分感谢

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10楼2018-09-08 06:58:48
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