应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助大家啊，Overlap pcr连接不上
51/1返回列表
查看: 5527  |  回复: 12
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yuevis

铜虫 (小有名气)
已领完
求助大家啊，Overlap pcr连接不上
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

如下

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2018-08-27 12:49:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcsxq0606

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
弥散很可能是片段GC富集，或者引物3'端GC富集。你这重叠30bp足够，我们都用15bp

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
10楼2018-08-28 20:45:37
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

yuevis

铜虫 (小有名气)
我做四个片段连在一起，先把中间两个overlap连上了，接近1000bp，剩下两个片段都接近500bp，这三个片段分别pcr都能扩增出来，但是overlap怎么都连不上，我用的是phanta酶，扩增总是从在很大的条带（大于2000bp）处开始弥散涂带，我用taq酶做overlap的话，在1000处有个弱条带，剩下也是弥散涂带。三个片段重叠区有30bp，Tm68度左右，68度试过，从68度往下降落也试过，也试过两步分开先不加引物，之后再加，以及开始就加引物的方法，都没有效果。之前怀疑是不是退火温度的问题导致没连上，可是几个温度都试了。求助各位给点意见。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2018-08-27 12:50:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuevis

铜虫 (小有名气)
求求各位，给点意见啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-08-27 12:57:15
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tc148

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试试俩俩overlap

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2018-08-27 14:45:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
zxthx6楼
2018-08-27 12:51   回复  
yuevis(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
hdchina20105楼
2018-08-27 12:50   回复  
yuevis(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
andrewhf4楼
2018-08-27 12:50   回复  
yuevis(金币+4): 谢谢参与
已获得4个金币 发自小木虫Android客户端
坏山药2楼
2018-08-27 12:50   回复  
yuevis(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫Android客户端
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭