24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 5617  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yuevis

铜虫 (小有名气)


已领完
求助大家啊,Overlap pcr连接不上
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫,下载小木虫客户端

回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuevis

铜虫 (小有名气)


我做四个片段连在一起,先把中间两个overlap连上了,接近1000bp,剩下两个片段都接近500bp,这三个片段分别pcr都能扩增出来,但是overlap怎么都连不上,我用的是phanta酶,扩增总是从在很大的条带(大于2000bp)处开始弥散涂带,我用taq酶做overlap的话,在1000处有个弱条带,剩下也是弥散涂带。三个片段重叠区有30bp,Tm68度左右,68度试过,从68度往下降落也试过,也试过两步分开先不加引物,之后再加,以及开始就加引物的方法,都没有效果。之前怀疑是不是退火温度的问题导致没连上,可是几个温度都试了。求助各位给点意见。

发自小木虫Android客户端
3楼2018-08-27 12:50:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

yuevis

铜虫 (小有名气)


7楼2018-08-27 12:57:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tc148

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试试俩俩overlap

发自小木虫IOS客户端
8楼2018-08-27 14:45:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuevis

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
8楼: Originally posted by Tc148 at 2018-08-27 14:45:56
试试俩俩overlap

试了,条带很暗,胶收在pcr就没有了,全是涂带

发自小木虫Android客户端
9楼2018-08-27 16:00:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
zxthx6楼
2018-08-27 12:51   回复  
yuevis(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2018-08-27 12:50   回复  
yuevis(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
andrewhf4楼
2018-08-27 12:50   回复  
yuevis(金币+4): 谢谢参与
已获得4个金币 发自小木虫Android客户端
坏山药2楼
2018-08-27 12:50   回复  
yuevis(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫Android客户端
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-03-27 5/250 2026-03-28 08:42 by 哒哒哒呱呱呱
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 266分,求材料冶金能源化工等调剂 +6 哇呼哼呼哼 2026-03-27 8/400 2026-03-28 07:15 by mmm just
[考研] 070300求调剂306分 +3 26要上岸 2026-03-27 3/150 2026-03-27 17:57 by arrow8852
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 0703一志愿9,初试成绩:338,四六级已过,有科研经历,求调剂! +3 Zuhui0306 2026-03-25 3/150 2026-03-27 14:09 by shangxh
[考研] 334求调剂 +3 雨清天晴 2026-03-21 3/150 2026-03-27 11:30 by 不吃魚的貓
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +10 材料学257求调剂 2026-03-23 11/550 2026-03-27 10:13 by YCIT- LHL
[考研] 349求调剂 +4 李木子啊哈哈 2026-03-25 4/200 2026-03-26 22:49 by fmesaito
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
信息提示
请填处理意见