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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 启动子载体构建
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Anu0103

新虫 (初入文坛)

[交流] 启动子载体构建 已有5人参与

目前在构建启动子的载体，用的是pBI121, 载体构建成功后转入农杆菌（GV3101、EHA105）之后，用菌落PCR验证，要么是二聚体，要么没有条带，请问有人知道是怎么个情况吗？
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1楼 2018-08-20 15:17:51
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snhajn

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做对照了吗？对照条带怎么样

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2楼2018-08-20 15:26:26
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Anu0103

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by snhajn at 2018-08-20 15:26:26
做对照了吗？对照条带怎么样

没有对照，用什么做对照
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3楼2018-08-20 15:36:34
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snhajn

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以用转入农杆菌的质粒做模板，p一下

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4楼2018-08-20 20:20:18
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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渊博震天: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-10-18 08:29:55
做菌液PCR试试，拿几个1.5ml或者2ml的管子装500ul含有抗性的培养液挑入几个菌落过夜培养，取100ul放入新的管子，离心弃上清加入等体积的灭菌水混匀，80°金属浴10分钟后再做PCR检测，前体是你要确定你的载体构建成功了。你可以用构建好的载体质粒为模板做阳性对照，水为模板做阴性对照。
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。
5楼2018-08-23 00:35:52
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大白兔没糖

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
渊博震天: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-10-18 08:30:06
本帖内容被屏蔽
6楼2018-08-23 16:38:00
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蝶恋花5280

铁虫 (小有名气)
★
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再提农杆菌的质粒再p，或者提高退火温度
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7楼2018-08-23 17:53:17
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是个甜豆豆呀

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的载体确定成功了吗？农杆菌确定转成功了吗？

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8楼2018-10-16 21:13:35
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