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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

[交流] 求助pcr

最近在做pcr，每次P出来的产物都很大，我要的是2k，p出来的都是4k！求各位分析一下原因！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-4 at 20:49 ]
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第三军团
1楼 2009-04-02 21:21:59
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛
引物特异性不足
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但愿人长久
2楼2009-04-03 08:29:36
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋
谢谢你的回答，不知道除了换引物之外还有没有其他办法
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第三军团
3楼2009-04-03 11:03:38
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anik

银虫 (正式写手)
离子对PCR也有影响。。。。
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4楼2009-04-03 16:46:21
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
换酶试试
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5楼2009-04-03 16:51:33
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
从头到尾看看是不是产物长度和你计算的有出入，或者你的模板是多拷贝都有可能，一般来说向你说的这种可能性不大
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会当凌绝顶，一览众山小
6楼2009-04-03 16:57:20
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小驹8578

新虫 (初入文坛)
你可以将你的引物3‘端的十个在你的模板里找一找，看看有没有可能有两个匹配位点，如果是，那么就很有可能引物匹配在了另一个位点，这样可能PCR出的是比你要的大的。或是你可以提高退火温度试试，如果有可能，可以做一个梯度PCR，一般提高退火温度可以提高引物特异性。
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7楼2009-04-03 17:34:00
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋
谢谢你们的回答，我有三对引物，退火温度做过52，55和58，第一次做55好像有，但其后怎么做都做不出来了。
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第三军团
8楼2009-04-04 13:28:12
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋
这是我做的pcr图
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第三军团
9楼2009-04-04 13:32:47
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
你用高保真的酶试一下，不知道你模板的量是不是很多，模板量如果大的话特异性就不高了
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10楼2009-04-04 21:10:26
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