24小时热门版块排行榜    

查看: 510  |  回复: 10
当前主题已经存档。

xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

[交流] 求助pcr

最近在做pcr,每次P出来的产物都很大,我要的是2k,p出来的都是4k!求各位分析一下原因!

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-4 at 20:49 ]
回复此楼
第三军团
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛

引物特异性不足
但愿人长久
2楼2009-04-03 08:29:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

谢谢你的回答,不知道除了换引物之外还有没有其他办法
第三军团
3楼2009-04-03 11:03:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)

离子对PCR也有影响。。。。
4楼2009-04-03 16:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)

换酶试试
5楼2009-04-03 16:51:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

从头到尾看看是不是产物长度和你计算的有出入,或者你的模板是多拷贝都有可能,一般来说向你说的这种可能性不大
会当凌绝顶,一览众山小
6楼2009-04-03 16:57:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小驹8578

新虫 (初入文坛)

你可以将你的引物3‘端的十个在你的模板里找一找,看看有没有可能有两个匹配位点,如果是,那么就很有可能引物匹配在了另一个位点,这样可能PCR出的是比你要的大的。或是你可以提高退火温度试试,如果有可能,可以做一个梯度PCR,一般提高退火温度可以提高引物特异性。
7楼2009-04-03 17:34:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

谢谢你们的回答,我有三对引物,退火温度做过52,55和58,第一次做55好像有,但其后怎么做都做不出来了。
第三军团
8楼2009-04-04 13:28:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

这是我做的pcr图
第三军团
9楼2009-04-04 13:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欣晴5832

金虫 (小有名气)

你用高保真的酶试一下,不知道你模板的量是不是很多,模板量如果大的话特异性就不高了
10楼2009-04-04 21:10:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xutao 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工(085600)296求调剂 +5 稻妻小编 2026-03-26 5/250 2026-03-26 13:32 by yujianx
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 10/500 2026-03-26 13:11 by 公瑾逍遥
[考研] 315分求调剂 +5 26考研上岸版26 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:11 by laoshidan
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 300分,材料,求调剂,英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 352求调剂 +3 大米饭! 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123!
[考研] 一志愿东华大学化学070300,求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见