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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

[交流] 求助pcr

最近在做pcr,每次P出来的产物都很大,我要的是2k,p出来的都是4k!求各位分析一下原因!

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-4 at 20:49 ]
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第三军团
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛

引物特异性不足
但愿人长久
2楼2009-04-03 08:29:36
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

谢谢你的回答,不知道除了换引物之外还有没有其他办法
第三军团
3楼2009-04-03 11:03:38
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anik

银虫 (正式写手)

离子对PCR也有影响。。。。
4楼2009-04-03 16:46:21
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

换酶试试
5楼2009-04-03 16:51:33
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

从头到尾看看是不是产物长度和你计算的有出入,或者你的模板是多拷贝都有可能,一般来说向你说的这种可能性不大
会当凌绝顶,一览众山小
6楼2009-04-03 16:57:20
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小驹8578

新虫 (初入文坛)

你可以将你的引物3‘端的十个在你的模板里找一找,看看有没有可能有两个匹配位点,如果是,那么就很有可能引物匹配在了另一个位点,这样可能PCR出的是比你要的大的。或是你可以提高退火温度试试,如果有可能,可以做一个梯度PCR,一般提高退火温度可以提高引物特异性。
7楼2009-04-03 17:34:00
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

谢谢你们的回答,我有三对引物,退火温度做过52,55和58,第一次做55好像有,但其后怎么做都做不出来了。
第三军团
8楼2009-04-04 13:28:12
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

这是我做的pcr图
第三军团
9楼2009-04-04 13:32:47
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欣晴5832

金虫 (小有名气)

你用高保真的酶试一下,不知道你模板的量是不是很多,模板量如果大的话特异性就不高了
10楼2009-04-04 21:10:26
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