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mrkeper

新虫 (初入文坛)

[求助] 浸花法转化拟南芥的问题 已有2人参与

浸花法转化拟南芥的时候需要添加乙酰丁香酮嘛,具体的浓度是多少,什么时候添加,是摇菌的时候还是侵染液里添加

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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
侵染液,150微摩尔每升

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2018-08-16 07:28:47
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Cgiven

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

菌液准备
(1). 培养菌液至OD600达 0.8-1.5;
(2). 制备重悬渗透培养液(1L):1/2MS,50g蔗糖,0.5g MES,500μl Silwet L-77, PH 5.7。;
(3). 离心,5000rpm,15min,收集菌体,弃上清,并倒置在消过毒的纸巾上,用5ml 重悬渗透培养液重悬,然后加上剩余的悬浮液,使OD600至1.0-1.5。
转化
将上述农杆菌菌液倒在小烧杯里,静置1h后,将长有拟南芥的培养皿倒扣于其上,保证莲座以上部分浸没于菌液上,2-3min以后取出来,侧置于托盘上,并覆盖保鲜膜以保持湿度,第二天将其直立,仍覆盖保鲜膜3-4天,可以根据情况在培养3-4天或者一周后,再侵染一次,待种子成熟以后,收获种子。
3楼2018-08-25 17:34:19
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