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whlz630

金虫 (正式写手)

[交流] PCR问题

PCR三个泳道使用的是同一对引物,来源于三个不同的菌落质粒模板,循环数是32,有的泳道背景很模糊,是什么原因?
是不是模板降解,还是其他原因?
PCR条带图如下:
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小猫三两只

金虫 (正式写手)


350784478(金币+1):谢谢参与
你模板是多大

杂带很多,会不会是DNA污染

另外改变一下退火温度试试看
2楼2009-04-02 12:38:01
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whlz630

金虫 (正式写手)

模板是大肠杆菌质粒
模板浓度是200ng/微升
PCR体系是25微升,模板使用量是1微升
3楼2009-04-02 12:55:25
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whlz630

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 小猫三两只 at 2009-4-2 12:38:
你模板是多大

杂带很多,会不会是DNA污染

另外改变一下退火温度试试看

你指的DNA污染是什么意思啊?
退火温度是59度
4楼2009-04-02 12:56:01
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

原因如下:
1模板降解有可能,但是可能性很小,可以试着调整一下模板的浓度和纯度
2弥散条带,通常都是引物和模板错配或者不配引起的,用保真性高一点的酶或者检查一下引物
3引物浓度大小也有可能引起弥散
会当凌绝顶,一览众山小
5楼2009-04-02 21:38:05
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛

提高退火温度,减少模板,增加几个循环数
但愿人长久
6楼2009-04-03 08:31:52
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