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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR问题
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whlz630

金虫 (正式写手)

[交流] PCR问题

PCR三个泳道使用的是同一对引物，来源于三个不同的菌落质粒模板，循环数是32，有的泳道背景很模糊，是什么原因？
是不是模板降解，还是其他原因？
PCR条带图如下：
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1楼 2009-04-02 12:29:40
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★
350784478(金币+1):谢谢参与
你模板是多大

杂带很多,会不会是DNA污染

另外改变一下退火温度试试看
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2楼2009-04-02 12:38:01
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whlz630

金虫 (正式写手)
模板是大肠杆菌质粒
模板浓度是200ng/微升
PCR体系是25微升，模板使用量是1微升
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3楼2009-04-02 12:55:25
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whlz630

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 小猫三两只 at 2009-4-2 12:38:
你模板是多大

杂带很多,会不会是DNA污染

另外改变一下退火温度试试看

你指的DNA污染是什么意思啊？
退火温度是59度
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4楼2009-04-02 12:56:01
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
原因如下：
1模板降解有可能，但是可能性很小，可以试着调整一下模板的浓度和纯度
2弥散条带，通常都是引物和模板错配或者不配引起的，用保真性高一点的酶或者检查一下引物
3引物浓度大小也有可能引起弥散
赞一下 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
5楼2009-04-02 21:38:05
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛
提高退火温度，减少模板，增加几个循环数
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但愿人长久
6楼2009-04-03 08:31:52
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