24小时热门版块排行榜    

查看: 4822  |  回复: 23
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

关Q想毕业

新虫 (小有名气)

[求助] pMD19-T载体连接,怎么都连接不上是怎么回事?求大神 已有6人参与

我的目的片段36Kb左右,用的酶是TaKaRa的PreMix Taq,连接体系是1μl19-T,1.5μl回收产物,2.5μl水,5μlSolution Ⅰ,16°C,30分钟,转入DH5α感受态,然后用氨苄板筛,然后做菌液pcr。
同一株困用19-T的通用引物P一遍,用我自己目的基因的特异引物P一遍,我挑了50个菌落,什么都没有P出来,不管是T载体的还是我自己目的基因的,都没有P出来,请问大神们是哪里出了问题?
还有一个问题想请教,我看这个19-T载体的说明书说什么蓝白菌落的,我怎么没有遇到,还有和19-T载体装在一起的那个Control Insert是什么,我的体系里没有正常吗?

@youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨儿天0320

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也认为你的目的片段太大了,可以试试过夜连接
7楼2018-08-06 14:40:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

晓风晚唱

铜虫 (小有名气)

2楼2018-08-06 09:09:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Agonilb

新虫 (小有名气)

目的片段会不会太大了,PMD19-T也就是2600多,我一般加4μl回收产物产物,连三个小时,你可试试过夜。

发自小木虫Android客户端
3楼2018-08-06 10:12:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

关Q想毕业

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Agonilb at 2018-08-06 10:12:22
目的片段会不会太大了,PMD19-T也就是2600多,我一般加4μl回收产物产物,连三个小时,你可试试过夜。

感谢回复,我忘了说一点,我用氨苄板筛的,每次都长出很多,但是菌液pcr却P不出T载体的带,这是怎么回事?

发自小木虫IOS客户端
4楼2018-08-06 10:49:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见