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郭金凤

新虫 (初入文坛)


已领完
TA克隆目的片段连接不上
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各位大神,我用的是TAKARA的PMDT19载体,阳性对照出来了,试过4℃过夜连接,16℃连接30分钟,1小时,2小时,都没有连接上,蓝白斑,蓝斑比白斑多,白班很少,或者很多蓝斑和很多白班,把培养液离心留下100uL涂板的!挑白斑接菌液12小时,菌液PCR没有目的条带!全部是空载,我的SOC也在37℃预热了!问题应该出在哪里呢?转化是42℃一分钟,冰盒冷却3分钟!阴性对照也做了!含有氨苄的板什么都没有,没有添加东西的板有菌体长出!我的目的片段是951,1030,1500,1800应该可以连上吧,菌液PCR只有500多有阳性对照条带,别的都没有!求助啊

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八戒哎哟

新虫 (初入文坛)


5楼2018-08-05 13:47:11
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郭金凤

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
5楼: Originally posted by 八戒哎哟 at 2018-08-05 13:47:11
什么酶批的?

是用天根的Taq酶

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7楼2018-08-05 13:48:27
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木元雨

木虫 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你是单酶切还是双酶切?会不会是前面的部分出了问题?

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11楼2018-08-05 14:01:54
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郭金凤

新虫 (初入文坛)


想做双酶切,但是我现在是目的基因与T载体连不上

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12楼2018-08-05 14:05:40
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1、目的条带浓度高不高?
2、是用高保真酶pcr的吗?那个要记得加A喔

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13楼2018-08-05 14:09:53
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郭金凤

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
13楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-08-05 14:09:53
1、目的条带浓度高不高?
2、是用高保真酶pcr的吗?那个要记得加A喔

目的条带都在100ng左右,用的是普通PCR天根TAQ酶,有加A功能的

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14楼2018-08-05 15:31:30
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by 郭金凤 at 2018-08-05 15:31:30
目的条带都在100ng左右,用的是普通PCR天根TAQ酶,有加A功能的
...

切胶回收后100ng?

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15楼2018-08-05 16:06:40
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维尼2

木虫 (著名写手)


16楼2018-08-05 21:16:17
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郭金凤

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
15楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-08-05 16:06:40
切胶回收后100ng?
...

大于100

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17楼2018-08-06 23:40:18
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wangj0826

禁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

18楼2018-09-13 10:10:34
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wangj0826

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

19楼2018-09-13 10:11:43
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上帝li子

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
和你一样的问题,我用的是天根PGM-T克隆试剂盒,也是做了好几次都不成功

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20楼2018-11-11 10:06:00
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简单回复
2018-08-05 13:43   回复  
郭金凤(金币+3): 谢谢参与
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2018-08-05 13:45   回复  
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2018-08-05 13:46   回复  
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pandongzi6楼
2018-08-05 13:48   回复  
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2018-08-05 13:50   回复  
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2018-08-05 13:51   回复  
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木元雨10楼
2018-08-05 13:52   回复  
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