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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » TA克隆目的片段连接不上
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郭金凤

新虫 (初入文坛)
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TA克隆目的片段连接不上
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各位大神，我用的是TAKARA的PMDT19载体，阳性对照出来了，试过4℃过夜连接，16℃连接30分钟，1小时，2小时，都没有连接上，蓝白斑，蓝斑比白斑多，白班很少，或者很多蓝斑和很多白班，把培养液离心留下100uL涂板的！挑白斑接菌液12小时，菌液PCR没有目的条带！全部是空载，我的SOC也在37℃预热了！问题应该出在哪里呢？转化是42℃一分钟，冰盒冷却3分钟！阴性对照也做了！含有氨苄的板什么都没有，没有添加东西的板有菌体长出！我的目的片段是951，1030，1500，1800应该可以连上吧，菌液PCR只有500多有阳性对照条带，别的都没有！求助啊

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1楼 2018-08-05 13:43:01
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八戒哎哟

新虫 (初入文坛)
什么酶批的？

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5楼2018-08-05 13:47:11
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郭金凤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 八戒哎哟 at 2018-08-05 13:47:11
什么酶批的？

是用天根的Taq酶

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7楼2018-08-05 13:48:27
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木元雨

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是单酶切还是双酶切？会不会是前面的部分出了问题？

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11楼2018-08-05 14:01:54
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郭金凤

新虫 (初入文坛)
想做双酶切，但是我现在是目的基因与T载体连不上

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12楼2018-08-05 14:05:40
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渊博震天

版主 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1、目的条带浓度高不高？
2、是用高保真酶pcr的吗？那个要记得加A喔

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13楼2018-08-05 14:09:53
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郭金凤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-08-05 14:09:53
1、目的条带浓度高不高？
2、是用高保真酶pcr的吗？那个要记得加A喔

目的条带都在100ng左右，用的是普通PCR天根TAQ酶，有加A功能的

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14楼2018-08-05 15:31:30
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渊博震天

版主 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by 郭金凤 at 2018-08-05 15:31:30
目的条带都在100ng左右，用的是普通PCR天根TAQ酶，有加A功能的
...

切胶回收后100ng？

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15楼2018-08-05 16:06:40
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维尼2

木虫 (著名写手)
16℃6小时

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16楼2018-08-05 21:16:17
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郭金凤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-08-05 16:06:40
切胶回收后100ng？
...

大于100

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17楼2018-08-06 23:40:18
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wangj0826

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
18楼2018-09-13 10:10:34
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wangj0826

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
19楼2018-09-13 10:11:43
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上帝li子

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
和你一样的问题，我用的是天根PGM-T克隆试剂盒，也是做了好几次都不成功

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20楼2018-11-11 10:06:00
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hdchina20102楼
2018-08-05 13:43   回复  
郭金凤(金币+3): 谢谢参与
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落单候鸟14713楼
2018-08-05 13:45   回复  
郭金凤(金币+5): 谢谢参与
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八戒哎哟4楼
2018-08-05 13:46   回复  
郭金凤(金币+4): 谢谢参与
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pandongzi6楼
2018-08-05 13:48   回复  
郭金凤(金币+2): 谢谢参与
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飞翔之翼988楼
2018-08-05 13:50   回复  
郭金凤(金币+1): 谢谢参与
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一点也不简单9楼
2018-08-05 13:51   回复  
郭金凤(金币+1): 谢谢参与
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木元雨10楼
2018-08-05 13:52   回复  
郭金凤(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫Android客户端
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