应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » TA克隆目的片段连接不上
201/1返回列表
查看: 1967  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

郭金凤

新虫 (初入文坛)
已领完
TA克隆目的片段连接不上
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

各位大神，我用的是TAKARA的PMDT19载体，阳性对照出来了，试过4℃过夜连接，16℃连接30分钟，1小时，2小时，都没有连接上，蓝白斑，蓝斑比白斑多，白班很少，或者很多蓝斑和很多白班，把培养液离心留下100uL涂板的！挑白斑接菌液12小时，菌液PCR没有目的条带！全部是空载，我的SOC也在37℃预热了！问题应该出在哪里呢？转化是42℃一分钟，冰盒冷却3分钟！阴性对照也做了！含有氨苄的板什么都没有，没有添加东西的板有菌体长出！我的目的片段是951，1030，1500，1800应该可以连上吧，菌液PCR只有500多有阳性对照条带，别的都没有！求助啊

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-08-05 13:43:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

八戒哎哟

新虫 (初入文坛)
什么酶批的？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
5楼2018-08-05 13:47:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郭金凤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 八戒哎哟 at 2018-08-05 13:47:11
什么酶批的？

是用天根的Taq酶

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-08-05 13:48:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木元雨

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是单酶切还是双酶切？会不会是前面的部分出了问题？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
11楼2018-08-05 14:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郭金凤

新虫 (初入文坛)
想做双酶切，但是我现在是目的基因与T载体连不上

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
12楼2018-08-05 14:05:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1、目的条带浓度高不高？
2、是用高保真酶pcr的吗？那个要记得加A喔

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
13楼2018-08-05 14:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郭金凤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-08-05 14:09:53
1、目的条带浓度高不高？
2、是用高保真酶pcr的吗？那个要记得加A喔

目的条带都在100ng左右，用的是普通PCR天根TAQ酶，有加A功能的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2018-08-05 15:31:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by 郭金凤 at 2018-08-05 15:31:30
目的条带都在100ng左右，用的是普通PCR天根TAQ酶，有加A功能的
...

切胶回收后100ng？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
15楼2018-08-05 16:06:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

维尼2

木虫 (著名写手)
16℃6小时

发自小木虫Android客户端
回复此楼
16楼2018-08-05 21:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郭金凤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-08-05 16:06:40
切胶回收后100ng？
...

大于100

发自小木虫Android客户端
回复此楼
17楼2018-08-06 23:40:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangj0826

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
18楼2018-09-13 10:10:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangj0826

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
19楼2018-09-13 10:11:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

上帝li子

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
和你一样的问题，我用的是天根PGM-T克隆试剂盒，也是做了好几次都不成功

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
20楼2018-11-11 10:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
hdchina20102楼
2018-08-05 13:43   回复  
郭金凤(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫IOS客户端
落单候鸟14713楼
2018-08-05 13:45   回复  
郭金凤(金币+5): 谢谢参与
已获得5个金币 发自小木虫IOS客户端
八戒哎哟4楼
2018-08-05 13:46   回复  
郭金凤(金币+4): 谢谢参与
已获得4个金币 发自小木虫IOS客户端
pandongzi6楼
2018-08-05 13:48   回复  
郭金凤(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
飞翔之翼988楼
2018-08-05 13:50   回复  
郭金凤(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
一点也不简单9楼
2018-08-05 13:51   回复  
郭金凤(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
木元雨10楼
2018-08-05 13:52   回复  
郭金凤(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫Android客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 郭金凤 的主题更新
201/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 上海工程技术大学 激光智能制造课题组 2027级博士研究生招生 +5 oxidpl 2026-09-20 7/350 2026-09-27 10:43 by Equinoxhua
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:21 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:15 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:03 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
[教师之家] 课题组招2027级博士 上海工程技术大学 激光智能制造方向 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:37 by oxidpl
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？ +4 13108017953 2026-09-21 4/200 2026-09-24 10:06 by kudofaye
[有机交流] 有机合成以后会不会被AI改变？做科研的虫友怎么看 +5 zapen 2026-09-20 8/400 2026-09-23 17:21 by tianxiaoxian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭