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04swlcm

金虫 (小有名气)


[交流] PCR问题

我今天跑的菌落PCR条带很淡在150bp左右,但是我的目的条带在1400bp左右
整整一个数量级之差,请教各位大侠主要问题处在哪里呢?
谢谢大家帮组!PCR个试剂都是本月新买的,应该没什么问题啊?
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04swlcm

金虫 (小有名气)


补充

我的PCR体系是:
10*PCR  buffer :5ul
Mg2+:   3ul
dNTP(10um each):4ul
P1,P2(10um):各1.5ul
taq 酶:1ul
ddH2O:up to 50ul
挑取单菌落

才接触PCR,不知道体系有问题没?先谢谢指点
2楼2009-03-29 20:46:52
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小小木虫8580

金虫 (小有名气)

是引物二聚体吧
3楼2009-03-29 20:56:59
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mofatuzi

新虫 (小有名气)

引物二聚体,你的片段没P出来,就是那个克隆不是不要的,继续挑继续P
4楼2009-03-29 21:35:06
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DNA6593

新虫 (初入文坛)

我常用的PCR反应体系(25ul)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):鼓励新虫~ 4-1 09:14
buffer :2.5ul
Mg2+:   2ul
dNTP: 1ul
P1,P2(10um):各1ul
菌液:2ul
taq 酶:0.25ul
ddH2O:15.25ul
total: 25ul
多做两次,可能就会出来的,有的时候浓度不够,也出不了带,试试纯化后有带不。
呵呵,做实验,慢慢来,不能急的。
平凡生活
5楼2009-03-29 21:51:13
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04swlcm

金虫 (小有名气)


呵呵,谢谢大家哈
我在试试,加油
6楼2009-03-29 22:30:54
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

学习一下,最近我pcr也p不出来
第三军团
7楼2009-03-31 23:46:07
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