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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR问题
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04swlcm

金虫 (小有名气)

[交流] PCR问题

我今天跑的菌落PCR条带很淡在150bp左右，但是我的目的条带在1400bp左右
整整一个数量级之差，请教各位大侠主要问题处在哪里呢？
谢谢大家帮组！PCR个试剂都是本月新买的，应该没什么问题啊？
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1楼 2009-03-29 20:31:32
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mofatuzi

新虫 (小有名气)
引物二聚体，你的片段没P出来，就是那个克隆不是不要的，继续挑继续P
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4楼2009-03-29 21:35:06
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04swlcm

金虫 (小有名气)

补充

我的PCR体系是：
10*PCR  buffer :5ul
Mg2+:   3ul
dNTP(10um each）:4ul
P1，P2(10um):各1.5ul
taq 酶：1ul
ddH2O:up to 50ul
挑取单菌落

才接触PCR，不知道体系有问题没？先谢谢指点
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2楼2009-03-29 20:46:52
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DNA6593

新虫 (初入文坛)

我常用的PCR反应体系（25ul）

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):鼓励新虫~ 4-1 09:14
buffer :2.5ul
Mg2+:   2ul
dNTP: 1ul
P1，P2(10um):各1ul
菌液：2ul
taq 酶：0.25ul
ddH2O:15.25ul
total: 25ul
多做两次，可能就会出来的，有的时候浓度不够，也出不了带，试试纯化后有带不。
呵呵，做实验，慢慢来，不能急的。
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平凡生活
5楼2009-03-29 21:51:13
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04swlcm

金虫 (小有名气)
呵呵，谢谢大家哈
我在试试，加油
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6楼2009-03-29 22:30:54
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