24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 833  |  回复: 2

wangbo_97

新虫 (初入文坛)

[求助] crispr grna载体构建单酶切问题 已有1人参与

请教各位前辈,我搜索很多cas9/grna载体中,插入grna多为单酶切位点
想请教几个问题
这种商品化单酶切能否保证插入效率
产生自连会造成多大影响,
连接反了只能测序筛选吗,
如何保证单酶切连接构建grna载体的效率

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般crispr构建sgRNA所用的酶切位点都是Type IIS restriction enzymes that recognize asymmetric DNA sequences and cleave outside of their recognition sequence,建议你仔细观察。
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2018-07-06 13:13:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

碧豚湾

新虫 (小有名气)

想太多了,插入片段磷酸化后,基本上连接效率达百分之一百,我都是挑两个克隆测序就行

发自小木虫Android客户端
3楼2018-07-08 10:24:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangbo_97 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 如何实现卤原子转化 +3 BT20230424 2026-05-15 7/350 2026-05-19 19:23 by bencaidai
[考博] 云南大学材料与能源学院解琳课题组钙钛矿博士招生 +3 光伏爱好者 2026-05-17 5/250 2026-05-19 19:13 by 光伏爱好者
[基金申请] 评审有感 +10 popular289 2026-05-18 16/800 2026-05-19 14:46 by popular289
[有机交流] 反应很差,大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 3/150 2026-05-19 13:56 by xtlilibin
[论文投稿] Sci. Bull. 悲剧经验 +4 jyang1999 2026-05-16 4/200 2026-05-19 10:56 by maolC
[考博] 找博士生导师 +6 小代想上岸 2026-05-15 7/350 2026-05-19 10:22 by free_fisher
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +10 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 11/550 2026-05-19 10:03 by 嘻嘻哈哈乐呵呵
[考博] 26/27申博自荐-锂/钠电池方向 5+3 狗头军师. 2026-05-15 4/200 2026-05-19 09:10 by moonboat
[基金申请] 同样的基金本子,换个专家直接从C变A! +3 国自然国社科中 2026-05-19 3/150 2026-05-19 08:50 by Equinoxhua
[基金申请] 面上本子正文33页,违规吗?会被低分嘛? +8 1234567wang 2026-05-17 10/500 2026-05-18 18:52 by zzahkj
[基金申请] 国自然上会要求 +5 无名者登山 2026-05-18 9/450 2026-05-18 17:50 by BlakeReary
[基金申请] 青C资助名额大幅增加! +12 西葫芦炒鸡蛋 2026-05-13 16/800 2026-05-18 10:02 by Equinoxhua
[基金申请] 重磅!青年科学基金项目(C类)资助增幅预计超过50% +7 水和泥不是水泥 2026-05-13 10/500 2026-05-18 07:50 by 水和泥不是水泥
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
[文学芳草园] 半夜喝咖啡 +3 myrtle 2026-05-15 5/250 2026-05-18 01:03 by 小沈2018
[考博] 光量子物理方向 博士招生 1人(2026.09) +3 sandyworld 2026-05-15 4/200 2026-05-17 14:38 by sandyworld
[有机交流] 求有机合成大神指点三硫酸乙烯酯(CAS:2793408-99-6)的合成路线 30+3 Leekmid 2026-05-13 10/500 2026-05-16 16:37 by czyzsu
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
[文学芳草园] 风把牡丹吹跑了 +5 myrtle 2026-05-12 9/450 2026-05-15 15:27 by myrtle
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
信息提示
请填处理意见