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wangbo_97

新虫 (初入文坛)

[求助] crispr grna载体构建单酶切问题已有1人参与

请教各位前辈,我搜索很多cas9/grna载体中,插入grna多为单酶切位点
想请教几个问题
这种商品化单酶切能否保证插入效率
产生自连会造成多大影响,
连接反了只能测序筛选吗,
如何保证单酶切连接构建grna载体的效率

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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gyesang

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般crispr构建sgRNA所用的酶切位点都是Type IIS restriction enzymes that recognize asymmetric DNA sequences and cleave outside of their recognition sequence,建议你仔细观察。
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2018-07-06 13:13:23
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碧豚湾

新虫 (小有名气)

想太多了,插入片段磷酸化后,基本上连接效率达百分之一百,我都是挑两个克隆测序就行

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3楼2018-07-08 10:24:11
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