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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » crispr grna载体构建单酶切问题
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wangbo_97

新虫 (初入文坛)

[求助] crispr grna载体构建单酶切问题 已有1人参与

请教各位前辈，我搜索很多cas9/grna载体中，插入grna多为单酶切位点
想请教几个问题
这种商品化单酶切能否保证插入效率
产生自连会造成多大影响，
连接反了只能测序筛选吗，
如何保证单酶切连接构建grna载体的效率

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-07-05 14:51:15
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般crispr构建sgRNA所用的酶切位点都是Type IIS restriction enzymes that recognize asymmetric DNA sequences and cleave outside of their recognition sequence，建议你仔细观察。
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2018-07-06 13:13:23
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碧豚湾

新虫 (小有名气)
想太多了，插入片段磷酸化后，基本上连接效率达百分之一百，我都是挑两个克隆测序就行

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3楼2018-07-08 10:24:11
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