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lren_87铁杆木虫 (正式写手)
傻子乐
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[求助]
TA克隆，验证总不对 已有1人参与
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非常简单的实验，耽误了很久，一直都不对。 细菌16S片段，插入pMD-18t载体，连接转化完了后凃平板，挑取单菌落进行PCR验证，用的M13F和M13R的引物验证，要么PCR验证失败，要么PCR结果出现1-2条带，都非常亮，但是都大于2000bp，实际M13F和M13R间的序列+16S的序列应该是在1700bp左右。 后来直接把重组质粒提取出来，然后送测序，结果全部都不成功，测了10多次，要么套峰，要么直接信号弱。 这个问题怎么破？？？这么简单的实验，耽误了几个月了，求大佬伸出援手。 |
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