应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 10几个碱基杂交能不能用PAGE电泳跑出来？
101/1返回列表
查看: 1577  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

meng199102

新虫 (小有名气)

[求助] 10几个碱基杂交能不能用PAGE电泳跑出来？ 已有2人参与

最近跑胶跑到怀疑人生了。现求助万能的虫友，我的实验如下：
两条单链分别是30和60个碱基，但是只有连续12个碱基是互补的，我想通过电泳证明他们确实杂交了。目前试过10-20%的非变性PAGE胶和琼脂糖胶了，退火后室温静置2-3小时，loading dye 都跑出来，也没有显示出杂交带。有没有小伙伴有相关经验求告知，求分享啊！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-06-27 08:15:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

petty04

新虫 (职业作家)
★ ★
渊博震天: 金币+2, 鼓励积极回帖交流 2018-06-27 08:39:39
4℃跑胶，低电压长时间跑，胶里要加Mg离子，应该可以跑出杂交条带

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

meng199102 meng199102
2楼2018-06-27 08:33:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张青峰

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
meng199102: 金币+15, ★有帮助 2018-06-27 23:19:57
感觉有难度，12个碱基Tm值是多少？两条链有没有二级结构？如果两条单链自身形成的二级结构Tm较高，很难形成双链。
也只能试试了，像二楼说的加Mg2+。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

meng199102
3楼2018-06-27 10:24:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng199102

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by petty04 at 2018-06-27 08:33:22
4℃跑胶，低电压长时间跑，胶里要加Mg离子，应该可以跑出杂交条带

谢谢你的建议！有试过100 v跑2小时， 没试过低温跑。试过杂交的时候加Mg，请问胶里加Mg是防止跑胶的时候解链吗?
赞一下 回复此楼
4楼2018-06-27 23:06:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng199102

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张青峰 at 2018-06-27 10:24:27
感觉有难度，12个碱基Tm值是多少？两条链有没有二级结构？如果两条单链自身形成的二级结构Tm较高，很难形成双链。
也只能试试了，像二楼说的加Mg2+。

非常感谢！还真没想过Tm的问题，其中有一条链有二级结构。只能先试试低温加Mg跑了。之前还有看到文献说用变性PAGE胶跑的，到时候都试试。
赞一下 回复此楼
5楼2018-06-27 23:19:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng199102

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by petty04 at 2018-06-27 08:33:22
4℃跑胶，低电压长时间跑，胶里要加Mg离子，应该可以跑出杂交条带

按你说的试了，果然能跑开。再次感谢
赞一下 回复此楼
6楼2018-06-29 03:20:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lapt

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
meng199102: 金币+10, ★★★很有帮助 2018-07-04 02:11:08
镁离子可以稳定双链的形成，建议跑胶条件与反应条件保持一致，推荐用5mM镁离子以上，都可以试试
赞一下 回复此楼
7楼2018-07-03 16:19:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng199102

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lapt at 2018-07-03 16:19:28
镁离子可以稳定双链的形成，建议跑胶条件与反应条件保持一致，推荐用5mM镁离子以上，都可以试试

谢谢！不过我一直试到20 mM 镁离子才有效果，我看别人基本10mM就能行，不知道是不是有什么其他问题
赞一下 回复此楼
8楼2018-07-04 02:12:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lapt

木虫 (正式写手)
你可以使用IDT网站计算双链杂交的反应焓变，模拟杂交，看是不是反应本身的问题。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-07-05 09:31:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后春笋！

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lapt at 2018-07-05 09:31:46
你可以使用IDT网站计算双链杂交的反应焓变，模拟杂交，看是不是反应本身的问题。

你好，我想问一下那个IDT网站怎么用的，我不知道怎么计算两条杂交链的反应焓变，求指教

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2018-09-14 11:56:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 meng199102 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工 322求调剂 +6 然11 2026-03-19 6/300 2026-03-25 18:37 by haxia
[考研] 考研调剂 +5 呼呼？~+123456 2026-03-24 5/250 2026-03-25 18:15 by xcjcqu
[考研] 材料学硕333求调剂 +4 北道巷 2026-03-24 4/200 2026-03-25 14:16 by mapenggao
[考研] 材料学硕，求调剂 6+4 糖葫芦888ll 2026-03-22 9/450 2026-03-25 11:19 by greychen00
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-20 4/200 2026-03-25 10:16 by allen-yin
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +6 @taotao 2026-03-19 6/300 2026-03-25 08:37 by 木托莫露露
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +15 吃吃吃才有意义 2026-03-19 16/800 2026-03-24 19:51 by 了了了了。。
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +3 哈哈157349 2026-03-21 3/150 2026-03-24 14:11 by zhyzzh
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考研] 求调剂材料学硕080500，总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭