应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 10几个碱基杂交能不能用PAGE电泳跑出来？
101/1返回列表
查看: 1776  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

meng199102

新虫 (小有名气)

[求助] 10几个碱基杂交能不能用PAGE电泳跑出来？ 已有2人参与

最近跑胶跑到怀疑人生了。现求助万能的虫友，我的实验如下：
两条单链分别是30和60个碱基，但是只有连续12个碱基是互补的，我想通过电泳证明他们确实杂交了。目前试过10-20%的非变性PAGE胶和琼脂糖胶了，退火后室温静置2-3小时，loading dye 都跑出来，也没有显示出杂交带。有没有小伙伴有相关经验求告知，求分享啊！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-06-27 08:15:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

petty04

新虫 (职业作家)
★ ★
渊博震天: 金币+2, 鼓励积极回帖交流 2018-06-27 08:39:39
4℃跑胶，低电压长时间跑，胶里要加Mg离子，应该可以跑出杂交条带

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

meng199102 meng199102
2楼2018-06-27 08:33:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张青峰

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
meng199102: 金币+15, ★有帮助 2018-06-27 23:19:57
感觉有难度，12个碱基Tm值是多少？两条链有没有二级结构？如果两条单链自身形成的二级结构Tm较高，很难形成双链。
也只能试试了，像二楼说的加Mg2+。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

meng199102
3楼2018-06-27 10:24:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng199102

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by petty04 at 2018-06-27 08:33:22
4℃跑胶，低电压长时间跑，胶里要加Mg离子，应该可以跑出杂交条带

谢谢你的建议！有试过100 v跑2小时， 没试过低温跑。试过杂交的时候加Mg，请问胶里加Mg是防止跑胶的时候解链吗?
赞一下 回复此楼
4楼2018-06-27 23:06:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng199102

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张青峰 at 2018-06-27 10:24:27
感觉有难度，12个碱基Tm值是多少？两条链有没有二级结构？如果两条单链自身形成的二级结构Tm较高，很难形成双链。
也只能试试了，像二楼说的加Mg2+。

非常感谢！还真没想过Tm的问题，其中有一条链有二级结构。只能先试试低温加Mg跑了。之前还有看到文献说用变性PAGE胶跑的，到时候都试试。
赞一下 回复此楼
5楼2018-06-27 23:19:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng199102

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by petty04 at 2018-06-27 08:33:22
4℃跑胶，低电压长时间跑，胶里要加Mg离子，应该可以跑出杂交条带

按你说的试了，果然能跑开。再次感谢
赞一下 回复此楼
6楼2018-06-29 03:20:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lapt

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
meng199102: 金币+10, ★★★很有帮助 2018-07-04 02:11:08
镁离子可以稳定双链的形成，建议跑胶条件与反应条件保持一致，推荐用5mM镁离子以上，都可以试试
赞一下 回复此楼
7楼2018-07-03 16:19:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng199102

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lapt at 2018-07-03 16:19:28
镁离子可以稳定双链的形成，建议跑胶条件与反应条件保持一致，推荐用5mM镁离子以上，都可以试试

谢谢！不过我一直试到20 mM 镁离子才有效果，我看别人基本10mM就能行，不知道是不是有什么其他问题
赞一下 回复此楼
8楼2018-07-04 02:12:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lapt

木虫 (正式写手)
你可以使用IDT网站计算双链杂交的反应焓变，模拟杂交，看是不是反应本身的问题。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-07-05 09:31:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后春笋！

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lapt at 2018-07-05 09:31:46
你可以使用IDT网站计算双链杂交的反应焓变，模拟杂交，看是不是反应本身的问题。

你好，我想问一下那个IDT网站怎么用的，我不知道怎么计算两条杂交链的反应焓变，求指教

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2018-09-14 11:56:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 meng199102 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +11 wangze12014 2026-08-14 13/650 2026-08-21 11:00 by 大快人心啦
[基金申请] 我面上完蛋了 +6 且听虎啸 2026-08-20 6/300 2026-08-21 10:59 by Vivilian
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +10 大萍1987 2026-08-20 12/600 2026-08-21 09:31 by 020100099
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭