应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » takara的T4 连接酶要连多久呀。。
101/1返回列表
查看: 21183  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

草哥cium

新虫 (正式写手)

[求助] takara的T4 连接酶要连多久呀。。 已有1人参与

在20 μl的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ的分解物在 16℃下反应30分钟时，有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位（unit）。
T4 DNA Ligase (350 U/μl)
那大家觉得10ug的和10ug的质粒要连多久。。。是不是几分钟就好了。。

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-06-22 15:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷路人啊

新虫 (小有名气)
过夜连
回复此楼
2楼2018-06-22 15:12:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草哥cium

新虫 (正式写手)


发自小木虫Android客户端
3楼2018-06-22 15:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

du20131580

金虫 (正式写手)
看你片段多大呀，长片段最好过夜哦

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2018-06-22 15:23:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草哥cium

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by du20131580 at 2018-06-22 15:23:59
看你片段多大呀，长片段最好过夜哦

549bp   捏

发自小木虫Android客户端
回复此楼
5楼2018-06-22 15:34:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

du20131580

金虫 (正式写手)
★
渊博震天: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-06-22 16:58:51
这个还好，不是很长。为了连接转化效率，建议还是16℃过夜连比较好。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2018-06-22 16:04:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Wang-Daryl

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
渊博震天: 金币+5, 鼓励有价值的回帖 2018-06-22 17:17:48
草哥cium(渊博震天代发): 金币+2, 回帖积极有用 2018-06-23 13:54:45
首先，根据你买的T4连接酶来确定一下连接体系，之后通过Nanodrop来测定一下目的片段和质粒浓度，根据说明书要求合理设置摩尔比，一般T4连接酶就是16℃过夜。如果是用无缝克隆的话就很快，但是引物设计要有同源臂。
赞一下 回复此楼
7楼2018-06-22 17:16:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呆呆的小羊

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by du20131580 at 2018-06-22 16:04:49
这个还好，不是很长。为了连接转化效率，建议还是16℃过夜连比较好。

你好，请问下6000的质粒片段和500的目的片段过夜连接的话大概多长时间
赞一下 回复此楼
8楼2018-07-31 11:11:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Agonilb

新虫 (小有名气)
过夜

发自小木虫Android客户端
回复此楼
9楼2018-07-31 12:32:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nineshow1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Wang-Daryl at 2018-06-22 17:16:59
首先，根据你买的T4连接酶来确定一下连接体系，之后通过Nanodrop来测定一下目的片段和质粒浓度，根据说明书要求合理设置摩尔比，一般T4连接酶就是16℃过夜。如果是用无缝克隆的话就很快，但是引物设计要有同源臂。

现在谁还用过夜连接的连接酶 都是10分钟的快速连接酶

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2018-11-17 21:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 草哥cium 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 340求调剂 +4 话梅糖111 2026-03-24 4/200 2026-03-24 21:41 by yuyu98412
[考研] 0854电子信息求调剂 +6 α____ 2026-03-22 7/350 2026-03-24 19:46 by sunjie8888
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:17 by pswait
[考研] 收08调剂生 +6 komorebi69 2026-03-18 6/300 2026-03-24 19:09 by 汪！？！
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +4 曼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:44 by 星空星月
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 277分求调剂，跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +4 cccchenso 2026-03-23 4/200 2026-03-23 23:00 by 徐ckkk
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-22 5/250 2026-03-23 22:01 by fuyu_
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭