应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » takara的T4 连接酶要连多久呀。。
101/1返回列表
查看: 21182  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

草哥cium

新虫 (正式写手)

[求助] takara的T4 连接酶要连多久呀。。 已有1人参与

在20 μl的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ的分解物在 16℃下反应30分钟时，有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位（unit）。
T4 DNA Ligase (350 U/μl)
那大家觉得10ug的和10ug的质粒要连多久。。。是不是几分钟就好了。。

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-06-22 15:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷路人啊

新虫 (小有名气)
过夜连
回复此楼
2楼2018-06-22 15:12:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草哥cium

新虫 (正式写手)


发自小木虫Android客户端
3楼2018-06-22 15:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

du20131580

金虫 (正式写手)
看你片段多大呀，长片段最好过夜哦

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2018-06-22 15:23:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草哥cium

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by du20131580 at 2018-06-22 15:23:59
看你片段多大呀，长片段最好过夜哦

549bp   捏

发自小木虫Android客户端
回复此楼
5楼2018-06-22 15:34:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

du20131580

金虫 (正式写手)
★
渊博震天: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-06-22 16:58:51
这个还好，不是很长。为了连接转化效率，建议还是16℃过夜连比较好。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2018-06-22 16:04:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Wang-Daryl

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
渊博震天: 金币+5, 鼓励有价值的回帖 2018-06-22 17:17:48
草哥cium(渊博震天代发): 金币+2, 回帖积极有用 2018-06-23 13:54:45
首先，根据你买的T4连接酶来确定一下连接体系，之后通过Nanodrop来测定一下目的片段和质粒浓度，根据说明书要求合理设置摩尔比，一般T4连接酶就是16℃过夜。如果是用无缝克隆的话就很快，但是引物设计要有同源臂。
赞一下 回复此楼
7楼2018-06-22 17:16:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呆呆的小羊

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by du20131580 at 2018-06-22 16:04:49
这个还好，不是很长。为了连接转化效率，建议还是16℃过夜连比较好。

你好，请问下6000的质粒片段和500的目的片段过夜连接的话大概多长时间
赞一下 回复此楼
8楼2018-07-31 11:11:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Agonilb

新虫 (小有名气)
过夜

发自小木虫Android客户端
回复此楼
9楼2018-07-31 12:32:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nineshow1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Wang-Daryl at 2018-06-22 17:16:59
首先，根据你买的T4连接酶来确定一下连接体系，之后通过Nanodrop来测定一下目的片段和质粒浓度，根据说明书要求合理设置摩尔比，一般T4连接酶就是16℃过夜。如果是用无缝克隆的话就很快，但是引物设计要有同源臂。

现在谁还用过夜连接的连接酶 都是10分钟的快速连接酶

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2018-11-17 21:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 草哥cium 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:17 by pswait
[考研] 招08考数学 +7 laoshidan 2026-03-20 16/800 2026-03-24 17:52 by 乌拉儿山脉
[考研] 0854 考研调剂 招生了！AI 方向 +5 pk3725069 2026-03-19 17/850 2026-03-24 17:30 by zhouxuan..
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 材料与化工328分调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-23 4/200 2026-03-24 11:03 by 544594351
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭