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蝈蝈3207

[交流] HPLC梯度洗脱时压力变化大,基线不稳

HPLC用梯度洗脱时压力有变化,使得基线老是走不稳,这正常么?要想基线走稳应该怎么办啊?
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蝈蝈3207

有两个峰不能从基线上分开,降低有机相也没多大效果,请问虫友们还有其他方法么?
2楼2009-03-27 16:15:27
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嘉木

金虫 (正式写手)

★ ★
jsys(金币+2,VIP+0):谢谢应助! 3-28 13:20
梯度洗脱压力有变化是正常的
至于基线不稳,有可能是气泡没除干净
LZ最好把你的图和条件都发一下,让大家看看
3楼2009-03-27 18:11:26
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ay45

金虫 (小有名气)

哈,我也是用梯度洗脱的,测样品时有时候是基线不平的(就是一般换了比例后就开始有些漂了),这样用自动积分的话,那个峰面积很不准,弄得不知该怎么办好呢!!
4楼2009-03-29 01:15:08
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loujay928

★ ★ ★
jsys(金币+3,VIP+0):感谢参与,哈哈! 3-31 12:20
走基线时基线在较长一段时间内不平稳是正常的~但在走基线之前你需要做以下几点:
1、确保流动相经过滤膜抽滤,并且超声20~30分钟,以排除流动相中的气泡;
2、色谱柱有可能在做上一次样品分析时没冲洗干净,导致此次色谱柱内压力过高,解决办法是用纯甲醇以每分钟0.5ML的流速冲柱子,洗脱。
3、走流动相之前,要尽可能排掉气管和泵中的气泡,方法应该知道吧~
4、走基线半小时后,如果基线基本上在一定频率内波动,就说明基线已基本平稳;此时,平衡基线,进一针样品,待这一针样品走完基线差不多就平了,如果还不平,继续用纯甲醇冲柱子~
至于两个峰不能分开,原因有很多种,一般的解决办法就是降低有机相配比或者降低流速~

附:以上几点都是我在平时操作中遇到情况的解决办法,可能不适用于你,我的机器是安捷伦1200,你可以参考参考;还有,峰分不开的样品是什么??把几个主要参数说一下啊~
5楼2009-03-29 01:31:10
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stare

木虫 (小有名气)


jsys(金币+1,VIP+0):感谢参与,哈哈! 3-31 12:20
同意四楼的建议,另外加一点,实验前一定要充分平衡柱子。
6楼2009-03-29 08:44:03
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蝈蝈3207

分不开的是邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二辛酯,我使用的柱子是ODS C18柱
7楼2009-03-31 08:52:33
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蝈蝈3207

我用的流动相是甲醇和水,
8楼2009-03-31 08:53:23
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Doww

★ ★
jsys(金币+2,VIP+0):感谢参与,哈哈! 3-31 12:20
引用回帖:
Originally posted by 蝈蝈3207 at 2009-3-31 08:52:
分不开的是邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二辛酯,我使用的柱子是ODS C18柱

应该很好分离啊。
1.在线脱气。
2.调整波长,254nm应该很稳。低波长肯定要飘。
3.提高起始甲醇浓度。
9楼2009-03-31 10:00:35
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Doww

引用回帖:
Originally posted by 蝈蝈3207 at 2009-3-31 08:52:
分不开的是邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二辛酯,我使用的柱子是ODS C18柱

应该很好分离啊。
1.在线脱气。
2.调整波长,254nm应该很稳。低波长肯定要飘。
3.提高起始甲醇浓度。
10楼2009-03-31 10:01:52
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