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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)

[求助] race引物设计问题已有4人参与

我设计好了引物,但是我看说明书发现那个15个长度的序列,请问我是要把这一段序列加在我设计的引物前面,再发给公司合成吗?

race引物设计问题


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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+3, 鼓励交流 2018-07-07 01:34:26
15bp那个是用来做无缝克隆连接的,需要再额外购买takara家的试剂盒,你想一步到位的话就加上。不想买的话就可以通过TA克隆来做

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2楼2018-06-08 06:48:38
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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jinkairui123 at 2018-06-14 14:55:19
肯定是要提供好序列啊

我的意思是说明书上面写的那个15bp长的序列需不需要加在我设计好的引物前面

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4楼2018-06-14 17:05:01
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生物里小可爱

新虫 (初入文坛)

求助,引物怎么设计,我也用的takara的试剂盒,但是没太看懂那个原理。引物需要设计在5/3端么

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6楼2018-07-06 00:35:59
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普通回帖

jinkairui123

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

肯定是要提供好序列啊
武汉金开瑞生物,提供核酸和蛋白的整体研究方案
3楼2018-06-14 14:55:19
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cmjll

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


渊博震天: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-07-13 13:31:29
可以加也可以不加,如果你要用试剂盒里面的载体克隆你就加,如果直接做TA克隆就不用加
5楼2018-06-22 22:56:43
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生物里小可爱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cmjll at 2018-06-22 22:56:43
可以加也可以不加,如果你要用试剂盒里面的载体克隆你就加,如果直接做TA克隆就不用加

想请问里面的载体克隆和TA克隆有什么区别,这个p出来的全长cDNA可以构建过表达载体么?谢谢

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7楼2018-07-06 00:37:10
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cmjll

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
drwhoknowss: 金币+3, 鼓励交流 2018-07-07 01:35:03
引用回帖:
7楼: Originally posted by 生物里小可爱 at 2018-07-06 00:37:10
想请问里面的载体克隆和TA克隆有什么区别,这个p出来的全长cDNA可以构建过表达载体么?谢谢
...

试剂盒里面带的载体是PUC19,已经是制备好的,我们设计的引物GSP上是多加了15个碱基就是为了与PUC19载体相连
TA克隆用的载体是T载,步骤就是TA克隆的步骤,用TA克隆的话在引物GSP上就不需要多加15个碱基
这个P不到全长的,5’RACE和3’RACE是分开的,测序结果出来了,你可以酶切下来,把两段连接起来做超表达是可行的
8楼2018-07-06 16:32:28
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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cmjll at 2018-07-06 16:32:28
试剂盒里面带的载体是PUC19,已经是制备好的,我们设计的引物GSP上是多加了15个碱基就是为了与PUC19载体相连
TA克隆用的载体是T载,步骤就是TA克隆的步骤,用TA克隆的话在引物GSP上就不需要多加15个碱基
这个P不 ...

我想知道,为什么race设计引物是已知序列的5'端设计的序列要反向互补过来,3'端设计的引物序列就直接是那个序列,那我就理解为5'端的引物为下引,3'端的引物为上引,然后因为这个,在我的想象中,race扩增就应该是如图一所示,但是说明书是确是图二那种,实在转不过弯来
race引物设计问题-1


race引物设计问题-2



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9楼2018-07-12 15:17:11
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麻糖先生

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 暴走的小鱼干 at 2018-07-12 15:17:11
我想知道,为什么race设计引物是已知序列的5'端设计的序列要反向互补过来,3'端设计的引物序列就直接是那个序列,那我就理解为5'端的引物为下引,3'端的引物为上引,然后因为这个,在我的想象中,race扩增就应该是 ...

不是太明白你的表达意思,但是可以分享的是说明书是要求有重叠部分,其实是重叠部分不是必须的,然后你说的反向互补,你在设计引物的过程应该对这个有所了解吧。
10楼2018-07-13 10:08:03
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