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Sarah23333

新虫 (著名写手)

[求助] pcr结果不稳定 已有2人参与

本人最近在用pcr筛选特定基因阳性株,用到的是大肠杆菌,煮沸法提取的DNA。第一次P出了很多阳性,后面针对这些阳性株再进行同样的pcr,就再也P不出来条带了,而且阳性株经常P不出条带,我想知道是哪个环节错了,是DNA提取的问题吗?我的操作…我始终觉得不可能会有这么大的失误,有没有哪位大神知道,指导指导哇

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Sarah23333

新虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by ghst110 at 2018-05-29 09:34:55
菌液裂解的跑胶也看不到总DNA条带吧,楼主你是没有用试剂盒提取基因组,而是简单的裂解后作模板扩增鉴定的,这不就是菌P吗。菌落PCR太简单了。一般的酶都可以做。可能你保存的模板(裂解的)已经降解了,导致第二次 ...

这个模板也是刚提没多久的,重提的试了下,结果阴性…所以不知道当初的阳性到底是怎么出来的

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12楼2018-05-29 13:17:39
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sketskys

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 鼓励 2018-05-29 07:19:42
有时候可能是煮沸法的问题 菌的浓度太高反而煮沸不好裂解出DNA 可以试下其他方法提DNA然后再PCR呢?

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2楼2018-05-27 22:25:44
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Sarah23333

新虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sketskys at 2018-05-27 22:25:44
有时候可能是煮沸法的问题 菌的浓度太高反而煮沸不好裂解出DNA 可以试下其他方法提DNA然后再PCR呢?

谢谢亲

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3楼2018-05-27 22:52:57
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ghst110

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小冀-: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-29 15:56:00
使用NaOH 20mM来煮沸裂解。或者选一个专用于菌P的mix吧。
*才随遇长,识以穷精*
4楼2018-05-28 10:04:01
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