应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » pcr结果不稳定
141/2返回列表12下一页
查看: 2278  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Sarah23333

新虫 (著名写手)

[求助] pcr结果不稳定 已有2人参与

本人最近在用pcr筛选特定基因阳性株，用到的是大肠杆菌，煮沸法提取的DNA。第一次P出了很多阳性，后面针对这些阳性株再进行同样的pcr，就再也P不出来条带了，而且阳性株经常P不出条带，我想知道是哪个环节错了，是DNA提取的问题吗？我的操作…我始终觉得不可能会有这么大的失误，有没有哪位大神知道，指导指导哇

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-05-27 22:11:25
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sketskys

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 鼓励 2018-05-29 07:19:42
有时候可能是煮沸法的问题 菌的浓度太高反而煮沸不好裂解出DNA 可以试下其他方法提DNA然后再PCR呢？

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2018-05-27 22:25:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

Sarah23333

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sketskys at 2018-05-27 22:25:44
有时候可能是煮沸法的问题 菌的浓度太高反而煮沸不好裂解出DNA 可以试下其他方法提DNA然后再PCR呢？

谢谢亲

发自小木虫Android客户端
回复此楼
3楼2018-05-27 22:52:57
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghst110

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小冀-: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-29 15:56:00
使用NaOH 20mM来煮沸裂解。或者选一个专用于菌P的mix吧。
赞一下 回复此楼
*才随遇长，识以穷精*
4楼2018-05-28 10:04:01
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sarah23333

新虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ghst110 at 2018-05-28 10:04:01
使用NaOH 20mM来煮沸裂解。或者选一个专用于菌P的mix吧。

真的会是DNA提取的问题吗？第一次阳性，后面阴性

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2018-05-28 16:38:01
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

二十一业

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by Sarah23333 at 2018-05-28 16:38:01
真的会是DNA提取的问题吗？第一次阳性，后面阴性
...

我想到一个别的可能性，你的目的基因是在质粒上的，传代培养后，质粒丢失导致后面阴性了
赞一下 回复此楼
6楼2018-05-28 17:14:45
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sarah23333

新虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 二十一业 at 2018-05-28 17:14:45
我想到一个别的可能性，你的目的基因是在质粒上的，传代培养后，质粒丢失导致后面阴性了...

但是我用的是同一次提取的DNA…

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-05-28 17:34:48
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

二十一业

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by Sarah23333 at 2018-05-28 17:34:48
但是我用的是同一次提取的DNA…
...

跑个胶看看还有没有DNA了……
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Sarah23333
8楼2018-05-28 18:00:24
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sarah23333

新虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 二十一业 at 2018-05-28 18:00:24
跑个胶看看还有没有DNA了……...

是那种简单的琼脂糖凝胶电泳吗？直接混合loading加DNA吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-05-28 18:35:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghst110

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Sarah23333 at 2018-05-28 18:35:11
是那种简单的琼脂糖凝胶电泳吗？直接混合loading加DNA吗
...

菌液裂解的跑胶也看不到总DNA条带吧，楼主你是没有用试剂盒提取基因组，而是简单的裂解后作模板扩增鉴定的，这不就是菌P吗。菌落PCR太简单了。一般的酶都可以做。可能你保存的模板（裂解的）已经降解了，导致第二次P不出。如果菌还有的的话，重新制备一下再PCR吧
赞一下 回复此楼
*才随遇长，识以穷精*
10楼2018-05-29 09:34:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Sarah23333 的主题更新
141/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +4 Tide man 2026-08-11 4/200 2026-08-12 00:39 by liuqidi
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +3 工厂打螺丝 2026-08-08 3/150 2026-08-11 13:42 by 会议编辑
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭