应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » pcr结果不稳定
141/2返回列表12下一页
查看: 2000  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Sarah23333

新虫 (著名写手)

[求助] pcr结果不稳定 已有2人参与

本人最近在用pcr筛选特定基因阳性株，用到的是大肠杆菌，煮沸法提取的DNA。第一次P出了很多阳性，后面针对这些阳性株再进行同样的pcr，就再也P不出来条带了，而且阳性株经常P不出条带，我想知道是哪个环节错了，是DNA提取的问题吗？我的操作…我始终觉得不可能会有这么大的失误，有没有哪位大神知道，指导指导哇

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-05-27 22:11:25
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sketskys

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 鼓励 2018-05-29 07:19:42
有时候可能是煮沸法的问题 菌的浓度太高反而煮沸不好裂解出DNA 可以试下其他方法提DNA然后再PCR呢？

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2018-05-27 22:25:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

Sarah23333

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sketskys at 2018-05-27 22:25:44
有时候可能是煮沸法的问题 菌的浓度太高反而煮沸不好裂解出DNA 可以试下其他方法提DNA然后再PCR呢？

谢谢亲

发自小木虫Android客户端
回复此楼
3楼2018-05-27 22:52:57
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghst110

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小冀-: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-29 15:56:00
使用NaOH 20mM来煮沸裂解。或者选一个专用于菌P的mix吧。
赞一下 回复此楼
*才随遇长，识以穷精*
4楼2018-05-28 10:04:01
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sarah23333

新虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ghst110 at 2018-05-28 10:04:01
使用NaOH 20mM来煮沸裂解。或者选一个专用于菌P的mix吧。

真的会是DNA提取的问题吗？第一次阳性，后面阴性

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2018-05-28 16:38:01
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

二十一业

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by Sarah23333 at 2018-05-28 16:38:01
真的会是DNA提取的问题吗？第一次阳性，后面阴性
...

我想到一个别的可能性，你的目的基因是在质粒上的，传代培养后，质粒丢失导致后面阴性了
赞一下 回复此楼
6楼2018-05-28 17:14:45
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sarah23333

新虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 二十一业 at 2018-05-28 17:14:45
我想到一个别的可能性，你的目的基因是在质粒上的，传代培养后，质粒丢失导致后面阴性了...

但是我用的是同一次提取的DNA…

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-05-28 17:34:48
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

二十一业

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by Sarah23333 at 2018-05-28 17:34:48
但是我用的是同一次提取的DNA…
...

跑个胶看看还有没有DNA了……
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Sarah23333
8楼2018-05-28 18:00:24
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sarah23333

新虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 二十一业 at 2018-05-28 18:00:24
跑个胶看看还有没有DNA了……...

是那种简单的琼脂糖凝胶电泳吗？直接混合loading加DNA吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-05-28 18:35:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghst110

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Sarah23333 at 2018-05-28 18:35:11
是那种简单的琼脂糖凝胶电泳吗？直接混合loading加DNA吗
...

菌液裂解的跑胶也看不到总DNA条带吧，楼主你是没有用试剂盒提取基因组，而是简单的裂解后作模板扩增鉴定的，这不就是菌P吗。菌落PCR太简单了。一般的酶都可以做。可能你保存的模板（裂解的）已经降解了，导致第二次P不出。如果菌还有的的话，重新制备一下再PCR吧
赞一下 回复此楼
*才随遇长，识以穷精*
10楼2018-05-29 09:34:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Sarah23333 的主题更新
141/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854电子信息求调剂 +3 α____ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:28 by zhq0425
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +5 纸鱼ly 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:11 by 学员8dgXkO
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭