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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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峰子大牛

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳结束之后没有任何条带 已有1人参与

做完蛋白电泳之后,除了marker显示正常,剩下的完全空白,不仅没有发现目标蛋白,别的任何蛋白都没有发现。
步骤是在处理样品的时候,1ml菌液,6000r离心10min,洗涤两次,还是1ml磷酸缓冲液重悬,超声波破碎彻底之后离心,取上清20ul加5ul  5xbuffer  上样。
我想知道是因为蛋白浓度太低太低了吗还是什么原因。

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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1ml菌液离心完能看到菌体么。建议直接把1ml菌液煮一下,然后取一点电泳。换个染色液试试。
2楼2018-05-23 08:18:13
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

蛋白浓度太低了,我一般情况1ml菌液加100ul裂解液裂解或者直接加100ul1xloading buffer煮10分钟离心上样

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3楼2018-05-23 08:40:59
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峰子大牛

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-23 08:18:13
1ml菌液离心完能看到菌体么。建议直接把1ml菌液煮一下,然后取一点电泳。换个染色液试试。

我收集10ml的菌液,重悬用1ml 的缓冲液,这样去超声波破碎,但是感觉始终破碎不了

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4楼2018-05-23 13:56:58
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峰子大牛

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-05-23 08:40:59
蛋白浓度太低了,我一般情况1ml菌液加100ul裂解液裂解或者直接加100ul1xloading buffer煮10分钟离心上样

谢谢

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5楼2018-05-23 14:11:41
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

10ml量应该够了,你可以加点溶菌酶,反复冻融3-4次后再去超声,效果应该不错。

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6楼2018-05-23 16:34:24
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峰子大牛

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-05-23 16:34:24
10ml量应该够了,你可以加点溶菌酶,反复冻融3-4次后再去超声,效果应该不错。

嗯嗯 好的 谢谢你

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7楼2018-05-23 21:50:44
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