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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 蛋白电泳结束之后没有任何条带
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峰子大牛

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳结束之后没有任何条带 已有1人参与

做完蛋白电泳之后，除了marker显示正常，剩下的完全空白，不仅没有发现目标蛋白，别的任何蛋白都没有发现。
步骤是在处理样品的时候，1ml菌液，6000r离心10min，洗涤两次，还是1ml磷酸缓冲液重悬，超声波破碎彻底之后离心，取上清20ul加5ul  5xbuffer  上样。
我想知道是因为蛋白浓度太低太低了吗还是什么原因。

@hc-material 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-05-22 23:52:21
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1ml菌液离心完能看到菌体么。建议直接把1ml菌液煮一下，然后取一点电泳。换个染色液试试。
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2楼2018-05-23 08:18:13
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
蛋白浓度太低了，我一般情况1ml菌液加100ul裂解液裂解或者直接加100ul1xloading buffer煮10分钟离心上样

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3楼2018-05-23 08:40:59
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峰子大牛

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-23 08:18:13
1ml菌液离心完能看到菌体么。建议直接把1ml菌液煮一下，然后取一点电泳。换个染色液试试。

我收集10ml的菌液，重悬用1ml 的缓冲液，这样去超声波破碎，但是感觉始终破碎不了

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4楼2018-05-23 13:56:58
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峰子大牛

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-05-23 08:40:59
蛋白浓度太低了，我一般情况1ml菌液加100ul裂解液裂解或者直接加100ul1xloading buffer煮10分钟离心上样

谢谢

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5楼2018-05-23 14:11:41
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
10ml量应该够了，你可以加点溶菌酶，反复冻融3-4次后再去超声，效果应该不错。

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6楼2018-05-23 16:34:24
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峰子大牛

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-05-23 16:34:24
10ml量应该够了，你可以加点溶菌酶，反复冻融3-4次后再去超声，效果应该不错。

嗯嗯 好的 谢谢你

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7楼2018-05-23 21:50:44
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