24小时热门版块排行榜    

查看: 1482  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 双荧光酶素实验,奇怪结果!?!? 已有2人参与

其实做的是一个验证性实验,如下:
promega的NF-kB启动子质粒,转化测序后没问题,提取无内毒素质粒。
人类TLR3基因扩增,克隆进p3X-flag载体,测序无误,提无内毒素质粒。
HEK293前一天晚上种24孔板,第二天70-80%汇合度lipo2000转染,TLR3:NF-kB:pRL-TK=10:10:1,6小时后换生长液。
24小时后用polyIC浓度梯度刺激12h,后测双荧光。
结果萤火虫荧光值均在80左右,海参荧光随着刺激浓度增加而增加百倍以上,700、1700,3000这个样子的。
不知道为什么会出现这种情况,反应液和终止液都是分装好保存的。@hc-material@gyesang
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖末子言

新虫 (小有名气)

1.转染效率低。我们平时都是10的4次方。2.底物1和2用的量少。3.polyic未刺激起来。

发自小木虫Android客户端
5楼2019-04-29 12:20:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

gzbjzjchen

铜虫 (小有名气)

2楼2018-07-31 19:45:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

PumbbaP

新虫 (初入文坛)

那个我想借楼求助一下,lipo2000同时转两种或者三种质粒的话,每种都500ng吗还是加起来500ng?以及lipo2000的量需要如何控制?以及换成无血清培养液的时候细胞飘起来怎么办?
3楼2018-08-31 12:19:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xianke909

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

根据我们之前的经验,空细胞的荧光素酶背景就有300左右,所以是不是转染的问题?
4楼2018-08-31 18:17:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +5 archvillain 2026-08-15 9/450 2026-08-15 12:06 by archvillain
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 8/400 2026-08-15 11:53 by KxMI1BYBxWX1
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 11:41 by KxMI1BYBxWX1
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见