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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 双荧光酶素实验,奇怪结果!?!? 已有2人参与

其实做的是一个验证性实验,如下:
promega的NF-kB启动子质粒,转化测序后没问题,提取无内毒素质粒。
人类TLR3基因扩增,克隆进p3X-flag载体,测序无误,提无内毒素质粒。
HEK293前一天晚上种24孔板,第二天70-80%汇合度lipo2000转染,TLR3:NF-kB:pRL-TK=10:10:1,6小时后换生长液。
24小时后用polyIC浓度梯度刺激12h,后测双荧光。
结果萤火虫荧光值均在80左右,海参荧光随着刺激浓度增加而增加百倍以上,700、1700,3000这个样子的。
不知道为什么会出现这种情况,反应液和终止液都是分装好保存的。@hc-material@gyesang
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PumbbaP

新虫 (初入文坛)

那个我想借楼求助一下,lipo2000同时转两种或者三种质粒的话,每种都500ng吗还是加起来500ng?以及lipo2000的量需要如何控制?以及换成无血清培养液的时候细胞飘起来怎么办?
3楼2018-08-31 12:19:08
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gzbjzjchen

铜虫 (小有名气)

2楼2018-07-31 19:45:06
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xianke909

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

根据我们之前的经验,空细胞的荧光素酶背景就有300左右,所以是不是转染的问题?
4楼2018-08-31 18:17:11
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肖末子言

新虫 (小有名气)

1.转染效率低。我们平时都是10的4次方。2.底物1和2用的量少。3.polyic未刺激起来。

发自小木虫Android客户端
5楼2019-04-29 12:20:11
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