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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 双荧光酶素实验，奇怪结果！？!?
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 双荧光酶素实验，奇怪结果！？!? 已有2人参与

其实做的是一个验证性实验，如下：
promega的NF-kB启动子质粒，转化测序后没问题，提取无内毒素质粒。
人类TLR3基因扩增，克隆进p3X-flag载体，测序无误，提无内毒素质粒。
HEK293前一天晚上种24孔板，第二天70-80%汇合度lipo2000转染，TLR3：NF-kB：pRL-TK=10:10:1，6小时后换生长液。
24小时后用polyIC浓度梯度刺激12h，后测双荧光。
结果萤火虫荧光值均在80左右，海参荧光随着刺激浓度增加而增加百倍以上，700、1700，3000这个样子的。
不知道为什么会出现这种情况，反应液和终止液都是分装好保存的。@hc-material@gyesang
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1楼 2018-05-14 18:30:26
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xianke909

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

根据我们之前的经验，空细胞的荧光素酶背景就有300左右，所以是不是转染的问题？
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4楼2018-08-31 18:17:11
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gzbjzjchen

铜虫 (小有名气)
说明这个是抑制转录?

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2楼2018-07-31 19:45:06
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PumbbaP

新虫 (初入文坛)
那个我想借楼求助一下，lipo2000同时转两种或者三种质粒的话，每种都500ng吗还是加起来500ng？以及lipo2000的量需要如何控制？以及换成无血清培养液的时候细胞飘起来怎么办？
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3楼2018-08-31 12:19:08
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肖末子言

新虫 (小有名气)
1.转染效率低。我们平时都是10的4次方。2.底物1和2用的量少。3.polyic未刺激起来。

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5楼2019-04-29 12:20:11
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